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第一部分铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑制作用观察目的:分析150株铜绿假单胞菌对白色念珠菌ATCC 90028的体外抑菌现象,探讨铜绿假单胞菌产色素情况、菌落形态及亚胺培南药敏情况对抑菌现象的影响。方法:1临床分离的150株铜绿假单胞菌作为研究对象,分别同白色念珠菌ATCC 90028行“十字”划线法和共孵育实验,观察铜绿假单胞菌对白色念珠菌的体外抑菌现象。2观察受试菌株的产色素情况、菌落形态、亚胺培南药敏情况,对比三种因素不同的铜绿假单胞菌对白色念珠菌ATCC 90028抑菌作用的差异,应用行×列表卡方检验、Wilcoxon符号秩和检验、Fisher确切概率法进行数据统计与分析。结果:1.“十字”划线法中,103株铜绿假单胞菌表现出抑制白色念珠菌生长的现象,47株对白色念珠菌生长无影响;共孵育实验中,150株铜绿假单胞菌均表现出不同程度抑制白色念珠菌生长的现象。150株铜绿假单胞菌中产色素菌株115株,不产色素菌株35株;粘液型菌株11株,非粘液型菌株139株;亚胺培南耐药菌株30株,亚胺培南敏感菌株120株。2.采用行×列表χ~2检验或Fisher确切概率法,分别对铜绿假单胞菌的产色素情况、菌落形态和亚胺培南药敏情况与“十字”划线法结果进行分析,结果表明铜绿假单胞菌的产色素情况与“十字”划线法中对白色念珠菌的抑菌现象有关联;不同菌落形态的铜绿假单胞菌在“十字”划线法中对白色念珠菌的抑制率有差别;但不同亚胺培南药敏情况的铜绿假单胞菌在“十字”划线法中对白色念珠菌的抑制率无差别。3.采用Wilcoxon符号秩和检验,分别对铜绿假单胞菌的产色素情况、菌落形态和亚胺培南药敏情况与共孵育实验中孢子数比值进行分析,结果表明与不产色素铜绿假单胞菌共孵育的白色念珠菌孢子数比值高于与产色素铜绿假单胞菌共孵育的白色念珠菌孢子数比值;与粘液型铜绿假单胞菌共孵育的白色念珠菌孢子数比值高于与非粘液型铜绿假单胞菌共孵育的白色念珠菌孢子数比值;但与亚胺培南耐药或敏感的铜绿假单胞菌共孵育的白色念珠菌孢子数比值总体分布位置无差别。第二部分铜绿假单胞菌对白色念珠菌的抑制机制探索目的:对铜绿假单胞菌进行同源性分析,并比较phzM和phzS表达水平,探讨期间表达水平对铜绿假单胞菌产色素情况及抑菌现象的影响。方法:1将受试菌株按照产色素情况及其对白色念珠菌的抑菌类型分为4组:产色素抑制组、产色素不抑制组、不产色素抑制组、不产色素不抑制组,行脉冲场凝胶电泳(PFGE),结合组别分析受试菌株同源性。2按组别挑选受试菌株行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测绿脓素合成相关基因phzM和phzS的表达水平,对比分析不同组别受试菌株的phzM和phzS基因表达水平。结果:PFGE结果显示41株受试菌株属于41种不同带型,相似系数在57.5%至90.0%之间,菌株间亲缘关系较远。RT-q PCR结果表明8株菌中,phz M表达量产色素菌株是不产色素菌株的105.9%,对白色念珠菌生长抑制的菌株是不抑制菌株的94.4%;phzS表达量产色素菌株是不产色素菌株的97.7%,对白色念珠菌生长抑制的菌株是不抑制菌株的107.3%。结论:1.产色素的铜绿假单胞菌及非粘液型的铜绿假单胞菌在对白色念珠菌的生长抑制中表现出明显优势,而铜绿假单胞菌的亚胺培南药敏情况与白色念珠菌的抑制情况无关。2.41株受试铜绿假单胞菌同源性均较远。8株受试菌株phzM和phzS基因的表达量不同组别间无明显差别。phzM和phzS基因不是唯一调节铜绿假单胞菌产生绿脓素的因素,对白色念珠菌的抑制作用并无直接关系。