论文部分内容阅读
目的：(1)胃癌CD44+细胞是否分选成功和CD44+细胞是否具有肿瘤干细胞特性。(2)研究前胃泌素、胃泌素、膜联蛋白2在CD44+细胞、BGC-823细胞、CD44-细胞的表达情况。(3)探讨前胃泌素、胃泌素、膜联蛋白2对BGC-823细胞和CD44+细胞生长、侵袭能力的影响。方法：(1)应用CD44免疫磁珠从胃癌BGC-823细胞中分选出CD44+细胞,流式细胞仪(FCM)和免疫荧光检测CD44+细胞中CD44的表达,鉴定CD44+细胞是否分选成功。利用FCM分析细胞周期,无血清培养CD44+细胞检测是否具有干细胞特性。(2)流式细胞仪、细胞免疫荧光、细胞免疫组化检测前胃泌素、胃泌素、膜联蛋白2在CD44+细胞、BGC-823细胞和CD44-细胞的表达情况。(3)MTT法检测前胃泌素mAb、胃泌素mAb、膜联蛋白2mAb对CD44+细胞和BGC-823细胞生长的抑制作用,Boyden小室检测三者对CD44+细胞和BGC-823细胞侵袭能力的影响。结果：(1)细胞免疫荧光和流式细胞仪结果显示：CD44+细胞中高表达CD44(90.20±2.24),显著高于BGC-823细胞组(9.57±2.35),(P<0.05)：细胞周期分析示,CD44+细胞组处于G0/G1期的细胞为71.1±5.6%,显著高于BGC-823细胞组(47.7.±3.5%),(P<0.05)；CD44+细胞在无血清培养7天后能够形成圆形克隆球,而CD44-细胞无血清培养7天后不能形成圆形克隆球。(2)流式细胞仪、细胞免疫荧光和细胞免疫组化结果显示CD44+细胞中前胃泌素(55.29±3.84)、胃泌素(55.08±4.10)、膜联蛋白2(48.33±1.45)的表达,明显高于在BGC-823细胞和CD44-细胞的表达水平(P<0.05)。(3)浓度1mg/ml和2mg/ml前胃泌素mAb,0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml胃泌素mAb,1mg/ml和2mg/ml膜联蛋白2mAb能够抑制BGC-823细胞的生长,与对照组相比差异具有统计学意义,(P<0.05or P<0.01)。(4)1mg/ml和2mg/ml前胃泌素mAb和0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml膜联蛋白2mAb能够抑制CD44+细胞的生长,与对照组相比差异具有统计学意义,(P<0.05or P<0.01);0.25mg/ml,0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml胃泌素mAb均不能抑制CD44+细胞的生长,与对照组相比差异无统计学意义,(P>0.05)。(5)前胃泌素mAb、胃泌素mAb、膜联蛋白2mAb处理BGC-823细胞,侵袭穿膜细胞数分别为40.39±10.61、43.17±7.63、42.34±5.66,与对照组相比差异均有统计学意义,(P<0.05)。(6)前胃泌素mAb和膜联蛋白2mAb处理CD44+细胞侵袭穿膜细胞数分别为70.15±4.77、76.42±9.45,与对照组相比差异均有统计学意义,(P<0.05)；胃泌素mAb组侵袭穿膜细胞数为82.25±5.91,与对照组(83.67±2.38)相比差异无统计学意义,(P>0.05)。结论：(1)无血清培养和细胞周期结果证实,CD44+细胞具有肿瘤干细胞的特性。(2)胃癌CD44+细胞中高表达前胃泌素、胃泌素、膜联蛋白2,提示三者与胃癌干细胞有关。(3)前胃泌素mAb、胃泌素mAb、膜联蛋白2mAb能够抑制BGC-823细胞的生长和侵袭,提示前胃泌素、胃泌素和膜联蛋白2促进BGC-823细胞的生长和侵袭。(4)前胃泌素mAb和膜联蛋白2mAb能够抑制CD44+细胞的生长和侵袭,提示前胃泌素与膜联蛋白2对CD44+细胞的增殖和侵袭有促进作用。