海带(Laminaria)养殖品种遗传多样性的RAPD分析

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本研究以四个海带(Laminaria)养殖群体为研究对象,采用RAPD分子标记技术对四个群体的遗传结构进行了研究,分析了各群体内的遗传变异、遗传多样性,以及四个群体间的遗传分化。主要结果如下: 对分别用SDS法、常规CTAB法、改良CTAB法三种方法提取的海带基因组DNA,进行紫外吸收检测、电泳检测和RAPD扩增检测。结果表明除SDS法外,其余两种方法均可获得完整的海带基因组DNA,RAPD扩增谱带清晰稳定。尤以改良CTAB法提取的DNA质量较好。 对海带RAPD-PCR条件进行了优化。优化条件为:(1)每一反应体系总体积25μL,含2.5μL 10×buffer,40ngDNA模板,0.25μM引物,2.5mMMgCI2,0.2mM dNTP,1U Taq酶;(2)扩增程序:94℃,5min→[94℃,1min→37℃,1min→72℃,2min]×40→72℃,10min。 17个RAPD随机引物对每个群体各20个海带样本的基因组DNA进行了扩增,共获得136个重复性好且谱带清晰的RAPD标记,片断大小在0.2-1.5kb之间,四个群体的多态位点比例在39.71%-50.00%之间,Nei基因多样性指数在0.1728-0.2312之间,Shanoon多样性指数在0.2481-0.3270之间。其中对照群体遗传多样性水平最高,本牛群体、荣福群体次之,而福建群体最低。总体上,群体内个体间遗传差异明显,四个群体的遗传多样性水平较高。利用Shannon多样性指数和Nei多样性指数估算群体遗传变异的来源,Shannon多样性指数表明这四个海带养殖群体的遗传变异有83.01%存在于群体内:Nei指数统计的海带养殖群体问遗传分化为0.1218,说明海带养殖群体的遗传变异有12.18%存在于群体间。两者结论指出群体间存在一定程度的分化。AMOVA的分析结果表明,群体间属于中等分化水平。 本实验结果表明RAPD技术是一种简便有效的辅助育种的标记方法,对人工选育具有良好的指导性作用。
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