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目的:研究肾集合管细胞顶膜钙通路的转运体或通道的分子特性以及钙传导的调节因素,以探索在肾集合管中的钙传导通路调节异常是否与常染色体隐性多囊性肾的发生发展相关。 方法:应用正常的小鼠肾集合管上皮细胞系,orpk cilia(+)细胞和从小鼠来源的常染色体隐性多囊性肾的肾集合管上皮细胞系,orpk cilia(-)细胞为研究对象进行如下实验:(1)采用内膜向外的单通道膜片钳技术来检测肾集合管细胞顶端膜和基底膜EGF处理后顶端膜的离子通道开放频率的变化,使用离子替换实验证明通道对离子通透的特点;(2)采用锰离子淬灭实验测定顶端膜EGF处理对钙离子通透性的影响;(3)采用免疫荧光染色技术来确定TRPP2和TRPV4的定位情况;(4)采用免疫共沉淀(Co-IP)实验技术确定TRPP2和TRPV4的表达及共定位;(5)采用细胞增殖试验比较EGF处理和共敲减TRPP2/TRPV4时肾集合管细胞的增殖情况。 结果:(1)在orpk cilia(+)和orpk cilia(-)细胞上记录到一个可被EGF调节的、23-pS单通道电导率的电流;(2)TRPP2和TRPV4物理性性结合并在细胞顶端膜共定位,23-pS单通道电流是由TRPP2/TRPV4形成的非选择性、可通透二价阳离子的通道复合体介导,EGF处理后通道的开放频率明显增加,并促进钙离子内流;但当应用酪氨酸激酶抑制剂AG1478或MAP激酶抑制剂PD98059预处理细胞后, EGF诱导的顶端膜通道开放频率受到显著抑制;(3)orpk cilia(-)细胞呈现较高的增殖速率,EGF处理明显增强细胞增殖,但共敲减TRPP2和TRPV4,或使用AG1478和PD98059预处理细胞,会明显削弱EGF诱导的细胞过度增殖。 结论:在orpk cilia(+)和orpk cilia(-)细胞中,TRPP2/TRPV4形成具有23-pS电导率的功能性异源通道复合体,该通道可通透钙离子;在orpk cilia(-)细胞中,EGF通过EGFR酪氨酸激酶通路激活TRPP2/TRPV4通道复合体,继而促进钙内流增细胞内钙离子浓度,后者致细胞增殖率显著提高。这种EGFR酪氨酸激酶依赖的TRPP2/TRPV4的持续激活可能与常染色体隐性多囊性肾的发生发展相关。