【摘 要】
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仔猪腹泻是引起仔猪死亡的重要原因。仔猪黄、白痢就是由致病性的大肠杆菌引起的仔猪最常见的一种细菌性腹泻疾病,发病率和死亡率都很高,严重威胁着养猪业的发展。抗生素是临床上治疗仔猪大肠杆菌病最常见的方法,但是由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药现象越来越严重,往往造成治疗无效。疫苗是预防和控制病毒、细菌等病原微生物感染最有效的途径,具有经济高效的特点。本试验对辽宁省某规模化种猪场7日龄内腹泻仔猪进行了大肠
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仔猪腹泻是引起仔猪死亡的重要原因。仔猪黄、白痢就是由致病性的大肠杆菌引起的仔猪最常见的一种细菌性腹泻疾病,发病率和死亡率都很高,严重威胁着养猪业的发展。抗生素是临床上治疗仔猪大肠杆菌病最常见的方法,但是由于抗生素的大量使用,导致细菌耐药现象越来越严重,往往造成治疗无效。疫苗是预防和控制病毒、细菌等病原微生物感染最有效的途径,具有经济高效的特点。本试验对辽宁省某规模化种猪场7日龄内腹泻仔猪进行了大肠杆菌分离鉴定,并以此菌株为抗原,制备了大肠杆菌氢氧化铝佐剂灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗,以期为规模化猪场仔猪大肠杆菌病的防控提供技术支撑。本试验首先对辽宁省某规模化种猪场腹泻仔猪肝脏进行了细菌鉴别培养、生化试验、16Sr DNA PCR扩增、测序及序列对比、基因进化树分析、药物敏感性试验。结果:细菌鉴定培养特性、形态学观察以及生化检验结果均符合大肠杆菌特征;经PCR扩增、测序及序列比对分析,与CP031919.1（其血清型为O145）大肠杆菌同源性最高,为99.44%;遗传进化分析所用的辽宁猪源大肠杆菌菌株与南京、扬州、湖南以及河北猪源大肠杆菌亲缘关系较近。药敏试验的结果显示,该分离菌耐药现象严重,除了对头孢噻肟敏感和对阿米卡星中敏之外,对多粘菌素B、头孢唑啉、阿奇霉素、阿莫西林、大观霉素、环丙沙星、红霉素、多粘菌素E、利福平、复方新诺明、强力霉素等多种抗生素均耐药。检测分离菌毒力基因,结果显示,分离菌株携带iss、iuc D、Fim H毒力基因;致病性试验取SPF级小鼠20只,分为对照组和试验组,试验组小鼠每只腹腔注射0.3 m L浓度为2.5×10~9CFU/ml菌液,对照组小鼠腹腔注射0.3 m L/只无菌PBS液。结果,试验组小鼠腹腔注射活菌液12 h开始出现死亡,至第30 h全部死亡,而对照组小鼠健康存活,说明分离菌株为强致病性大肠杆菌。以分离菌株为抗原,进行了氢氧化铝佐剂灭活疫苗和蜂胶佐剂灭活疫苗制备,并对其进行了安全性、免疫原性和动物攻毒保护性试验。结果:两种不同佐剂疫苗对小鼠强毒菌株攻毒均具有一定保护作用,其中氢氧化铝佐剂疫苗的保护率为70%,蜂胶佐剂疫苗的保护率为80%,说明蜂胶佐剂疫苗的保护率优于氢氧化铝佐剂疫苗。免疫球蛋白检测结果显示:蜂胶佐剂组与氢氧化铝佐剂组同对照组相比,免疫后14 d、21 d、28 d、35 d和42 d,免疫组（蜂胶佐剂组与氢氧化铝佐剂组）与对照组相比小鼠血清中Ig A抗体含量均显著提高,差异极显著（P＜0.01）;免疫后21 d和28 d,免疫蜂胶佐剂疫苗组Ig A抗体含量显著高于氢氧化铝佐剂疫苗,差异极显著（P＜0.01）;免疫后42 d,蜂胶佐剂组相较于氢氧化铝佐剂组差异显著（P＜0.05）。免疫后14 d、21d、28 d、35 d和42 d,免疫组与对照组相比,小鼠血清中Ig G抗体含量均显著提高,差异极显著（P＜0.01）;免疫后21 d,蜂胶佐剂疫苗组Ig G抗体含量显著高于氢氧化铝佐剂疫苗,差异极显著（P＜0.01）;免疫后28 d、35 d和42 d,蜂胶佐剂组于氢氧化铝佐剂组比较差异显著（P＜0.05）。结论:本试验从规模化种猪场腹泻仔猪群中成功分离出致病性大肠杆菌,所制备的氢氧化铝佐剂疫苗和蜂胶佐剂疫苗对小鼠均有很好的免疫原性和保护性,其中蜂胶佐剂疫苗的保护率优于氢氧化铝佐剂疫苗,该疫苗为有效防控仔猪大肠杆菌病奠定了基础。
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