论文部分内容阅读
目的:室周器官(circumvent ricular organs,CVOs)作为脑的窗口(windows of the brain)缺乏血脑屏障,但是存在免疫屏障的加强。小胶质细胞是中枢神经系统中主要的宿主巨噬细胞。它的存在对于室周器官存在免疫加强发挥着重要的作用。实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergicencephalomyelitis)是人类多发性硬化的经典动物模型,其典型病理改变为脱髓鞘、血管周围和脑室周围的炎细胞浸润以及血脑屏障的破坏。室周器官在EAE发病的过程中在形态学和细胞凋亡等方面变化都发生了显著的改变。本研究旨在通过观察穹窿下器和正中隆起小胶质细胞的分布、形态以及其在EAE发病的不同时间点(正常、潜伏期、发病极期、回复后期)的形态学变化,以探讨室周器官处小胶质细胞在脑内免疫状态改变时的作用,进一步揭示室周器官在EAE发病过程中的免疫调节作用。
方法:清洁级Wistar雌性大鼠60只,3月龄,体重230g~250g,由河北医科大学实验动物中心提供。实验动物予以GPSCH+CFA免疫抗原足垫内注射,制备EAE动物模型。分别取正常对照组、潜伏期(免疫后10天组)、发病极期(免疫后发病4分组),恢复期(发病后恢复为2分组)作为实验的研究对象。光镜标本制备:实验动物用4%的多聚甲醛灌注固定,取含有穹窿下器和正中隆起的脑块制备成石蜡切片,供苏木素-伊红染色及RCA-1组织化学染色用。电镜标本制备:以含4%多聚甲醛和2.5%戊二醛的混合固定液进行灌注固定。取包含穹窿下器和正中隆起的组织供透射电镜标本制备用。统计学处理:小胶质细胞采用麦克奥迪数码医学图像分析系统(Motic Med6.0)记录细胞数目、胞体直径及突起长短。数据用均数加减标准差(x±s)表示。应用SNK-q检验,进行两两比较,以P<0.05为有显著性差异。
结果:HE染色结果:SFO和ME在潜伏期均可见细胞数目较正常对照组增多,增多的细胞体积较小。在发病极期细胞增多更加显著,形状多样。在恢复期又逐渐与正常对照组相似。RCA-1组化染色结果:正常组对照组SFO和ME的小胶质细胞都以阿米巴状和分枝状两种状态存在。在潜伏期和发病极期,静息态小胶质细胞大量被激活,数目增加,胞体增大,突起数目减少、长度变短,并在发病极期达到峰值。随着EAE症状的好转恢复期小胶质细胞数目逐渐减少,胞体大小逐渐恢复正常,突起数目增多且长度增加。透射电镜结果:正常对照组可见SFO和ME的小胶质细胞内仅能见到少量的溶酶体;胞核上的染色质分布均匀,电子密度低。在潜伏期和发病极期溶酶体数目增多、体积增大,并可见吞饮小泡;胞核上的染色质边集、浓缩,间距增宽,电子密度升高,在发病极期出现高峰。恢复期观察到溶酶体数目较发病极期减少,体积缩小;胞核上的染色质分布情况和电子密度接近正常对照组。
结论:
1、室周器官的小胶质细胞在正常情况下存在两种状态:激活态和静息态,与相邻脑区的只存在静息态小胶质细胞的情况不同。说明室周器官能够即时对外界的刺激发生反应,室周器官虽然缺乏血脑屏障,但它有免疫屏障的加强,从而使得整个脑屏障疏而不漏。 2、在EAE的发病过程中SFO和ME部位的小胶质细胞发生了明显的形态学改变,即先由静息态转变为激活态,数目增多,体积增大,突起变短,从而发挥功能;后期又恢复静息状态存在。说明室周器官处小胶质细胞与EAE的发病过程密切相关,在时间上表现出高度的一致性。