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目的:探讨水杨酸钠诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs-B3)中热休克蛋白27(heat shock protein 27)的表达及与丝裂素蛋白激活激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号途径的相关性。
方法:以人晶状体上皮细胞作为研究对象,检测人晶状体上皮细胞以不同浓度的水杨酸钠(0,25,35,45,55mmol/L)刺激1h去除刺激再分别培养6h后的Hsp27表达情况;比较55mmol/L水杨酸钠刺激不同时间(1-5h)以及去除刺激再分别培养6h的Hsp27表达水平;检测55mmol/L水杨酸钠刺激1h去除刺激再分别培养(1-24h)后的Hsp27表达情况;检测55mmol/L水杨酸钠刺激人晶状体上皮细胞后的P38MAPK、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)及JNK/SAPK信号通路活化情况;在阻断实验中,比较分别加入P38MAPK、ERK1/2、JNK/SAPK信号通路特异性阻断剂SB203580、PD98059、SP600125预孵育1h后再加入水杨酸钠刺激1h后,去除水杨酸钠刺激培养6h后的HSP27水平变化情况。Western bloting方法检测HSP27及P38MAPK、ERK1/2、JNK/SAPK、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK1/2、磷酸化JNK/SAPK的表达水平;RT-PCR方法检测HSP27mRNA的表达情况;免疫组化方法检测HSP27蛋白表达水平。
结果:人晶状体上皮细胞正常对照组仅有微弱的HSP27的表达,而(35-55mmol/L)水杨酸钠刺激1h去除刺激再培养6h后可使HSP27表达显著上调并呈浓度依赖性;55mmol/L水杨酸钠刺激(1-5h)下并不能诱导HSP27的升高,在去除刺激再培养3h后表达明显增加,6h达到高峰,直至24h恢复到基础水平,且HSP27的表达量随着水杨酸钠刺激时间的延长(1-5h)而降低。水杨酸钠刺激30 min时磷酸化p38MAPK表达增加,1 h表达显著,在去除水杨酸钠刺激再培养1h时后下降,3h恢复到基础水平;磷酸化ERK1/2在水杨酸钠刺激时间内并未升高,而在去除水杨酸钠刺激再培养1h后开始增加,3h表达显著,6h达到高峰;水杨酸钠刺激1h以及去除刺激再培养过程中均未见到磷酸化JNK的表达;加入P38MAPK、ERK1/2特异性阻断剂预处理人晶状体上皮细胞1h后可使水杨酸钠诱导的HSP27表达受到显著抑制,而加入JNK特异性阻断剂并未对水杨酸钠诱导的HSP27表达产生影响。
结论:水杨酸钠可诱导人晶状体上皮细胞HSP27的表达,P38MAPK和ERK1/2信号通路参与了HSP27表达的过程。