苦槛蓝中黄酮化合物的提取及抗氧化活性研究

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黄酮类化合物是苦槛蓝中主要活性成分类型之一,在国内外文献中均有大量报道,但是苦槛蓝中总黄酮含量、提取纯化黄酮的方法、苦槛蓝黄酮的抗氧化活性研究鲜见报道。本文研究了苦槛蓝总黄酮的测定方法、提取纯化工艺和提取黄酮的抗氧化活性,主要研究内容与结果如下:  1.建立了苦槛蓝黄酮含量测定方法。利用紫外分光光度计法,以芦丁为标准品,通过直接测定法、NaNO2-Al(NO3)3-NaOH法、Al(NO3)3-CH3COOK法和AlCl3法,比较苦槛蓝中黄酮物质和芦丁标准物质的紫外吸收峰,结果表明AlCl3显色法在273nm最适合苦槛蓝黄酮含量的测定,其稳定性、精密度、加标回收率的相对标准偏差RSD分别为0.506%、1.30%、4.20%。  2.通过单因素与正交实验研究了苦槛蓝中黄酮的提取工艺。结果表明,影响苦槛蓝黄酮得率的主次因素为:温度>乙醇浓度>提取时间>料液比,最佳提取工艺条件为:90℃下,60%的乙醇,料液比1:25,提取2.0 h,重复提取3次,在此条件下苦槛蓝黄酮得率为5.16%,占总黄酮的85.71%。  3.通过比较不同树脂对苦槛蓝黄酮类化合物的静态吸附与解吸附性能的影响,筛选出D101大孔树脂最适合纯化苦槛蓝黄酮类化合物。其最佳纯化条件为:苦槛蓝黄酮上样液浓度为1.5 mg/mL、pH3.2、上样速率2 mL/min、径高比1:8进行吸附,吸附率为79.88%;2 BV去离子水洗去杂质后,用7 BV70%乙醇溶液、2 mL/min洗脱速率进行洗脱,洗脱率达到97.72%。黄酮纯度为14.72%的苦槛蓝粗黄酮经D101大孔树脂纯化后得苦槛蓝精制黄酮,黄酮平均回收率为88.0%,平均纯度为43.34%,为未纯化前的2.9倍。  4.以Vc为阳性对照通过测定还原和清除羟基自由基的能力,对苦槛蓝粗黄酮、苦槛蓝精制黄酮的体外抗氧化作用进行了评价,结果表明苦槛蓝粗黄酮、苦槛蓝精制黄酮都有较强的抗氧化活性,并具有量效关系。羟基自由基的清除能力大小为:Vc>苦槛蓝精制黄酮>苦槛蓝粗黄酮,还原能力的排序为:苦槛蓝精制黄酮>Vc>苦槛蓝粗黄酮。  5.对苦槛蓝精制黄酮进行分离,得到了3个黄酮化合物,其中已鉴定2个,分别是:芹黄素和木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯,其中木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷甲酯首次从苦槛蓝属中得到。
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