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第一部分应用LC-MS/MS建立测定生物样品中白藜芦醇和JBP485的分析方法目的:建立快速、高效、灵敏、专属的LC-MS/MS方法用于测定生物样品中白藜芦醇和JBP485的浓度。方法:各样品沉淀蛋白后,吸取上清液,氮气吹干并用流动相复溶,应用伊力特C18色谱柱(4.6μm×150 mm;5μm)分离,流动相为乙腈-水-甲酸(60:40:0.01,v/v/v),流速为0.5ml/min。采用电喷雾离子源(ESI源)多反应监测(MRM)模式,正离子扫描分析,m/z 309.1→120.3(乌苯美司,内标),m/z201.1→86.1(JBP485),m/z 229.1→107(白藜芦醇)。结果:白藜芦醇和JBP485的线性范围均为1-1000 ng/ml。日内及日间相对标准差均小于15%。结论:该方法适用于检测生物样本中白藜芦醇和JBP485的浓度。第二部分白藜芦醇通过上调肠道Pept1增强JBP485对吲哚美辛诱导小肠损伤的保护作用目的:研究白藜芦醇(Res)对JBP485在大鼠小肠和IEC-6细胞中对吲哚美辛诱导小肠损伤保护作用的影响。方法:采用大鼠灌胃给予吲哚美辛(14天,1.5mg/kg,1天2次)构建小肠损伤模型,将大鼠麻醉后取空肠肠段观察溃疡情况,测定小肠PGE2及HDL-c含量以及大鼠小肠HE染色来揭示白藜芦醇增强JBP485对吲哚美辛引起小肠损伤保护作用。通过检测小肠组织及IEC-6细胞GSH、SOD、MDA、CAT等说明白藜芦醇对JBP485抗氧化能力的影响。通过小肠组织MPO活性测定及检测IL-6、TNF-α、IL-1βmRNA水平来评价白藜芦醇对JBP485抗炎能力的影响。通过western blotting考察凋亡蛋白Bax、Bcl-2及COX1/2的表达,组织TUNEL染色及IEC-6细胞hoechst33342染色等实验方法考察白藜芦醇对JBP485抗凋亡能力的影响。采用大鼠in vivo药代动力学、in situ肠灌流和IEC-6细胞摄取等实验考察白藜芦醇对JBP485小肠吸收与胞内蓄积的影响及western blotting实验考察白藜芦醇对小肠与IEC-6细胞Pept1表达的影响。结果:给予保护药JBP485后,大鼠小肠的溃疡、肠黏膜坏死脱落、绒毛结构消失、炎性细胞浸润情况明显改善,JBP485与白藜芦醇共同给药使得上述病变进一步缓解。JBP485与白藜芦醇合用显著降低MDA水平及抑制细胞LDH的释放,进一步升高SOD、GSH、CAT、HDL-c与PGE2水平。MPO试剂盒与real-time(RT)PCR结果说明白藜芦可以增强JBP485的抗炎能力。JBP485与白藜芦醇合用与JBP485相比进一步上调小肠Bcl-2与COX-1、下调Bax与COX-2蛋白表达,TUNEL染色与hoechst33342染色说明白藜芦醇增强JBP485的抗凋亡能力。白藜芦醇上调小肠及IEC-6 Pept1的表达,大鼠in vivo、in situ肠灌流和IEC-6细胞摄取实验结果说明白藜芦醇增加JBP485的小肠吸收、体内暴露量及胞内蓄积。结论:白藜芦醇通过上调Pept1增加JBP485的小肠吸收与胞内蓄积量,从而增强JBP485对吲哚美辛诱导小肠损伤的保护作用。