新城疫（N ewcastle Disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）引起的一种烈性、高度致死性禽类传染性疾病。目前国内以基因Ⅶ型为主要流行毒株,为了探究NDV基因Ⅶ型与疫苗毒株之间致病性的差异,本研究通过高通量测序技术,系统对比分析HB株（基因Ⅶ型）与La Sota株（基因Ⅱ型）在感染鸡胚成纤维细胞（CEF）后,宿主基因转录组水平的差异变化,并通过反向遗传学构建了 La Sota株感染性克隆,为接下来关于天然免疫的深入研究提供了材料基础。通过将La Sota株与HB株在感染CEF后的转录样本进行比较后,共发现504条差异表达基因,其中有372条基因表达量上调,132条基因表达量下调;通过GO功能注释和KEGG信号通路富集发现,差异表达基因主要在天然免疫、细胞代谢以及MAPK等信号通路中存在明显富集;随机选取5个差异表达基因通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）对其表达水平与RNA-seq结果进行比较,证明了测序结果的可靠性。通过对天然免疫相关因子进行聚类分析,并结合差异蛋白互作网络,筛选了与天然免疫相关的基因,并通过RT-qPCR对PRRs受体、IFNs通路以及NF-κB通路的mRNA水平进行测定,最后通过一步夹心ELISA法对蛋白水平进行测定。聚类分析结果表明,NDV不同基因型在感染CEF后天然免疫相关通路上存在大量差异表达基因;RT-qPCR与ELISA结果均表明HB株感染组较La Sota株感染组相比,可以激起更为强烈的抗病毒反应以及炎症反应,而La Sota株感染宿主细胞后只引起少量炎症因子以及IFN-β的上调。宿主细胞主要通过RLRs以及NLRs途径识别HB株,而La Sota株则主要通过TLRs途径被识别。根据分析La Sota全长和载体序列,将全长分为七个片段,3’端引入T7 RNA聚合酶启动子与Xba Ⅰ酶切位点,5’端引入丁肝核酶序列、T7终止子以及MluⅠ酶切位点。借助分子子生物学技术将La Sota片段依次连接至pOK-12载体上,最终获得含有La Sota全长cDNA的克隆质粒,并将其命名为pOK-La Sota;构建含有辅助基因NP、P和L的真核表达质粒,分别命名为pCI-NP、pCI-P和pCI-L;通过间接免疫荧光以及微基因组对辅助质粒的表达能力以及生物学活性进行验证。最后,将pOK-La Sota全长cDNA质粒与三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L按照5:2:2:1共转染BSR-T7/5细胞,进行病毒拯救。为下一步研究病毒与细胞互作提供实验材料。