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补肾强身片由淫羊藿、菟丝子、金樱子、女贞子、狗脊(烫)五味中药组成,具有补肾强身的功效,用于腰酸足软,头晕耳鸣,眼花心悸。现有质量标准仅采用显微鉴别、化学反应鉴别和薄层鉴别来评价补肾强身片的质量,无含量测定项。目前,对补肾强身片的研究也仅局限于临床疗效观察、薄层鉴别和单一成分的含量测定,未见该复方物质基础及整体质量控制的研究。本课题采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对补肾强身片体外体内化学成分进行研究;应用超高效液相色谱(UPLC)对其指纹图谱及多成分含量测定质量评价方法进行了研究。主要研究内容如下:1.运用UPLC-Q-TOF-MS对复方补肾强身片的化学物质基础进行研究。以Agilent SB-C18(100 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱;乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相;体积流量0.5m L/min;电喷雾离子源;正、负离子模式下采集数据。通过与对照品及文献报道的质谱数据比对,共推断出50个化学成分结构,主要包括黄酮类、酚酸类、裂环环烯醚萜类、苯乙醇苷类和生物碱类成分,基本阐明复方补肾强身片的化学物质基础。2.采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析补肾强身片血中移行成分。以Agilent SB-C18(100 mm×4.6 mm,2.7μm)为色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相;体积流量0.5m L/min;电喷雾离子源;正、负离子模式下采集数据。结果在给药SD大鼠血浆中检测到15个原型入血成分,为进一步研究补肾强身片临床药效物质基础提供依据。3.建立补肾强身片UPLC指纹图谱。以Agilent SB-C18(100 mm×4.6 mm,2.7μm)为色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相;体积流量0.5m L/min;柱温40℃;检测波长215nm。应用相似度评价、聚类分析、主成分分析及正交偏最小二乘判别分析12批次补肾强身片指纹图谱进行质量评价。结果12批补肾强身片样品中有20个共有峰,并鉴定出其中9个(原儿茶酸、红景天苷、绿原酸、金丝桃苷、特女贞苷、朝藿定C、淫羊藿苷、山柰素、宝霍苷),相似度为0.843~0.970。12批样品可分成3类,并找到4个差异性标志物。该方法简便、可靠,可用于补肾强身片的质量控制。4.采用UPLC法同时测定补肾强身片中6种化学成分的含量。以Agilent SB-C18(100 mm×4.6 mm,2.7μm)为色谱柱;乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相;体积流量0.5m L/min;柱温40℃,检测波长260nm、325 nm、360 nm、224 nm、270nm。结果6种成分的检测范围分别为原儿茶酸:0.78~201.00 mg·L-1(r=0.9999)、绿原酸:0.79~202.60 mg·L-1(r=0.9997)、金丝桃苷:0.93~238.39 mg·L-1(r=0.9999)、特女贞苷:0.66~169.62 mg·L-1(r=0.9999)、朝藿定C:0.81~206.85 mg·L-1(r=0.9999)、淫羊藿苷:0.74~190.85mg·L-1(r=0.9999);平均回收率(n=6)分别为97.6%(RSD=1.00%),99.6%(RSD=1.54%),99.7%(RSD=1.45%),97.2%(RSD=0.79%),95.5%(RSD=0.44%),96.3%(RSD=0.92%)。为进一步提高和完善补肾强身片质量标准提供参考。