膝关节OA患者关节软骨IL-6基因异常甲基化及蛋白表达的实验研究

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目的:通过对膝关节骨性关节炎(Knee OA)患者关节软骨IL-6基因启动子区甲基化状态及IL-6蛋白表达的检测,探讨IL-6基因启动子区的异常甲基化在膝关节OA发生、发展中的作用。方法:采用酚-氯仿抽提(Sodium-Bisulfite)方法处理基因组DNA,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测IL-6基因启动子区甲基化变化情况。采用免疫组化方法检测IL-6蛋白表达。实验分为两组:13例健康软骨对照组和37例膝关节OA组。采用SPSS19.0统计软件进行分析,对实验数据作X2或Fisher’s确切概率法检验和Spearman等级相关分析。结果:1.健康软骨对照组与膝关节OA患者关节软骨IL-6启动子区甲基化状态比较健康软骨对照组与膝关节OA患者关节软骨IL-6启动子区甲基化百分率分别为76.92%(10/13)和21.62%(8/37),经Fisher’s确切概率法检验分析,两组间的差异有统计学意义(P=0.001)。2.健康软骨对照组与膝关节OA患者软骨细胞IL-6蛋白表达比较健康软骨对照组与膝关节OA患者软骨细胞IL-6蛋白阳性率分别为30.77%(4/13)和72.97%(27/37),经Fisher’s确切概率法检验分析,两组间的差异有统计学意义(P=0.018)。3.IL-6基因低甲基化及蛋白的表达与年龄的关系IL-6基因低甲基化及蛋白的表达与年龄无明显相关性(似然比0.136,P=0.934)4.膝关节OA患者关节软骨IL-6基因启动子区低甲基化与蛋白表达相关性分析29例IL-6启动子区低甲基化的膝关节OA患者中,有24例蛋白表达呈现阳性;而27例IL-6蛋白表达阳性的膝关节OA患者中,有24例IL-6启动子区低甲基化,经Spearman等级相关分析,说明IL-6启动子区低甲基化与IL-6表达呈正相关(r=0.420,P=0.01)。结论:1.膝关节OA患者关节软骨IL-6基因启动子区发生了低甲基化。2.膝关节OA患者关节软骨细胞工L-6蛋白表达高于正常人。3.IL-6启动子区低甲基化可能介导IL-6蛋白表达增加,从而参与膝关节OA患者关节软骨退变。
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