基于质谱流式细胞术的单细胞编码技术

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在临床大队列免疫细胞流式分析中,为避免批次间差异、提高数据可比性,同一批次的样本通常先编码,再一次性上机检测。流式细胞术采用荧光标记,由于标签数量极为有限以及检测峰太宽,难以做到既编码大队列样本又能保留足够的通道检测靶标蛋白。质谱流式细胞术使用金属标签代替荧光标签,同时通过细胞编码技术,大大提高了流式的检测效率,足以满足临床需求。本课题构建出一种基于质谱流式细胞术的用于临床大队列编码与检测的新技术。利用特定比例的同位素金属标签标记细胞表面普遍高表达的抗原(如CD45),以实现大队列的编码。由于金属质谱信号种类远远多于原有的荧光标签,由此打破了因通道数量限制而无法同时标记大队列和检测多靶标的瓶颈。在具体实验探究中,通过优化抗体浓度和质谱信号比例方案,构建了采用三种不同金属(166Er、169Tm和173Yb)以三种比例即可完成对19个样本的一次性编码检测的策略。该方法利用金标准方法进行双标验证,实际解码分群准确率在85%以上。使用编码技术后,样本与样本间不同表面标志蛋白的检测平均信号强度的变异系数大幅降低,极大地降低了质谱流式细胞术批次间差异,同时对非编码抗体(如CD3,CD4,CD8等)的稳定性探究中,对非编码和编码样本的数据拟合,得到相关系数均在0.9以上,证明该方法对样本检测信息保存度完好。通过该技术的建立,能大幅减少临床大样本的检测时间、降低抗体损耗、提高数据质量,为临床大队列样本的免疫细胞族群研究提供全新的手段。
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