用酵母三杂交系统克隆NF-IL63'UTRRNA结合蛋白基因

来源 :中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jj1385173
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NF-IL63是具有肿瘤抑制作用的mRNA调控元件,NF-IL63UTR导入肿瘤细胞能引起恶性表型的部分逆转,这种逆转与一种NF-IL63UTRRNA结合蛋白相关.因此克隆NF-IL63UTR结合蛋白对于揭示NF-IL63UTR的回复机制具有重要意义.通过构建缺失突变体,我们证实了NF-IL63UTR结合蛋白不仅能结合于NF-IL63UTR的3间的一个24nt序列,也能结合于5的一段75nt的序列.同时我们发现,NF-IL63UTR右能是进化上保守的蛋白,大肠杆菌、小鼠、人细胞中均存在NF-IL63UTR结合蛋白.运用酵母三杂交系统,并结合克隆颜色鉴定和5-氟乳清酸负在性筛选这两种方法,我们成功从人肝细胞cDNA库中筛选到了一个与NF-IL63UTRRNA钓饵专一结合的克函授生,该克隆编码了一个约70氨基酸的多肽,Genbank检索暗示这是一个新的RNA结合或识别模本.在大肠杆菌中以GST融合方式表达了该多肽.用纯化的GST融合多肽与NF-IL63UTRRNA进行结合验证实,该多肽是一个较大蛋白的一部分.
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