南极海冰细菌Pseudoalteromonas sp.抗逆相关蛋白的研究

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地球两极上覆盖着的广阔海冰为其内部附着的海冰细菌提供了一个极端复杂的生存空间。海冰细菌从液态的海水到被嵌入固体的海冰盐囊只需要极短的时间,其生存环境就经历了盐度和温度的剧烈变化。为了能在这骤变的环境中生长、生存和繁衍,海冰细菌在生理、代谢和遗传上进行了复杂的适应改变,使自身拥有了特殊的生理生化特性和基因表达调控机制。因此海冰细菌是研究逆境条件下生物适应机制的典型材料,对其耐盐性及其抗逆相关蛋白的研究有着非常重要的生物学意义。  本研究以南极海冰细菌为材料,通过两次筛选从中选出三株耐高盐的菌株ANT88、ANT319、ANT518,其中ANT319的生长情况最好。对三株菌的16SrRNA基因序列同源性和系统发育进行分析,结果表明这三株菌都属于假交替半胞菌属(Pseudoalteromonas sp.),在南极海冰细菌中属于常见典型菌株,对其适应机制的研究有着重要的科学意义。以菌株ANT319为对象,研究该菌株在不同盐度下的耐盐性和抗氧化酶类的活性。结果表明,此菌株的最适生长盐度为9%,随着盐度的升高,细胞内蛋白质含量升高,膜透性逐渐增加,SOD和POD的酶活性呈现先升高后降低的变化趋势,CAT活性和MDA则基本上保持不变,这些指标变化规律初步揭示了菌株的耐盐机制。利用差异蛋白质组技术,分析不同盐度下ANT319细胞表达的蛋白质差异图谱,发现盐度增加会产生两个重要的新蛋白质,经过串联质谱鉴定分别为冷激蛋白A(CspA-like protein)和冷休克DNA结合蛋白(Cold-shock DNA-binding protein),推测可能这两个蛋白在其耐盐机制中起着重要作用。同时对海冰细菌抗氧化系统的重要组分—硫氧还蛋白(Trx)进行了基因的克隆与表达,该基因DNA序列全长为327bp,且具有完整的开放阅读框,其编码108个氨基酸,保守的催化位点WDGPC。系统进化分析表明,该基因与P. haloplanktis.TAC125的同源性最高,并在大肠杆菌中成功表达,为生物遗传育种提供新的抗逆基因。
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