KHDRBS3基因在上皮性卵巢癌组织中的表达及其对人卵巢癌CAOV3细胞生长增殖的影响

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目的研究KHDRBS3(KH domain containing,RNA binding,signal transduction associated 3)基因在上皮性卵巢癌组织中的表达情况,探讨KHDRBS3基因对体外培养的卵巢癌CAOV3细胞生长增殖的影响。方法1、采用免疫组化SP法检测KHDRBS3基因在上皮性卵巢癌及癌旁组织中的表达情况,结果用X2检验进行分析。2、体外培养人卵巢癌CAOV3细胞,通过RNA干扰技术使KHDRBS3基因表达沉默后观察人卵巢癌CAOV3细胞生长增殖的变化情况。取对数生长期细胞分为未转染组,control-si RNA转染组,KHDRBS3-si RNA转染组;采用RT-PCR及Westem Blot验证KHDRBS3基因的沉默效果;采用MTT比色法比较不同组别CAOV3细胞生长增殖情况;采用流式细胞术(FCM)检测不同组别CAVO3细胞的周期分布。以上结果均使用单因素方差分析进行判定。结果1、KHDRBS3基因在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率高于癌旁卵巢组织(P<0.05)。2、RT-PCR及Westem Blot检测结果显示:通过细胞转染的方式成功构建了KHDRBS3基因缺陷的卵巢癌CAOV3细胞系,经灰度分析缺陷率可达80%(P<0.05)。3、MTT检测结果显示:KHDRBS3-si RNA转染组细胞在基因转染48小时后增殖速度明显减慢,与control-si RNA转染组及未转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),control-si RNA转染组与未转染组之间差异无统计学意义(P>0.05)。4、流式细胞术检测结果表明:KHDRBS3-si RNA转染组G0/G1期细胞比例较control-si RNA转染组和未转染组明显增高(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G2/M期细胞比例无明显变化(P>0.05),而control-si RNA转染组和未转染组之间无统计学差异(P>0.05)。提示KHDRBS3基因沉默可以使CAOV3细胞发生G0/G1期阻滞。结论KHDRBS3基因在上皮性卵巢癌组织的阳性表达率高于癌旁卵巢组织,抑制KHDRBS3基因的表达可以使卵巢癌CAOV3细胞发生G0/G1期阻滞,从而抑制细胞增殖。提示KHDRBS3基因可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关,有望成为上皮性卵巢癌基因及分子治疗的新靶点。
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