应用巢式PCR进行申克孢子丝菌的分子生物学鉴定

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目的 探讨孢子丝菌病的分子生物学快速诊断方法。 材料及方法 一、实验材料 1.实验菌株:临床分离的申克孢子丝菌38株(其中中国15株,日本11株,美国4株,委内瑞拉3株,阿根廷2株,澳大利亚、南非、法国各1株,mtDNA型1~24均包括其中)。克柔念珠菌、白念珠菌、马尔尼菲青霉、烟曲霉、疣状瓶霉、甄氏外瓶霉、皮炎外瓶霉、新型隐球菌、须癣毛癣菌、卡氏枝孢霉菌种各1株,均为中国医学科学院皮肤病研究所保存菌株。Ceratocystis minor 2株,均为日本Tokyo医学真菌研究所保存菌株。 2.实验动物:10只BALB/c小鼠,实验动物体重22g~24g,8~10W,购自辽宁省实验动物中心。小鼠被分为两组,1组雄性5只,1组雌性5只。 3.临床标本:9个经真菌培养确诊的人孢子丝菌病的病理活检标本来自于本科。 二、实验试剂 1.基因组DNA提取主要试剂 基因组DNA提取液CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)。 2.PCR主要试剂 2.1 真菌特异性外层引物SS1和SS2 2.2 真菌特异性内层引物SS3和SS4 3.动物实验试剂 3.1 标准菌株ATCC10268申克孢子丝菌菌悬液
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