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羊膜因来源充足、含有丰富的间充质干细胞以及没有伦理争议等优点,而成为再生治疗新的细胞来源。人羊膜间充质干细胞(Human amnion derived mesenchymal stem cells, hAMCs)具多向分化潜能和低免疫原性等特点,日渐成为细胞移植治疗的热点。本文以人类羊膜为研究对象,通过酶解-贴壁方法分离到羊膜间充质干细胞,考察其自我更新能力和多向分化潜能；通过有限稀释法获得形态各异的3支细胞克隆,对比克隆间以及克隆和杂合细胞间形态、自我更新能力、多向分化潜能、表面标记和干细胞基因表达等生物学特性；最后,对比静态和动态培养前后克隆与杂合细胞在数量及质量上的差异,探索规模化扩增克隆细胞的可行方法,为临床和基础研究提供基础。胰酶和胶原酶作用羊膜组织,通过贴壁培养可以获得以细长梭形为主兼有其它形态的单核细胞,该细胞具有形成成纤维样的细胞集落和多向分化的能力,在体外可向骨、脂肪和软骨细胞分化,鉴定其为羊膜间充质干细胞,并命名为杂合细胞。通过有限稀释法获得的3支克隆细胞分别命名为8B、11D和11F,在体外传代过程中保持其各自特有的细胞形态。第6代克隆和杂合细胞表现出不同的体外扩增特性,细长型克隆(8B和11F)具有更强的集落形成能力。克隆和杂合细胞均表达CD29、CD44和CD105,不表达CD14、CD34和CD45,其中CD105在克隆细胞系的表达明显高于杂合细胞。克隆和杂合细胞在干细胞基因Oct-4和Nanog-3表达上有差异。克隆和杂合细胞表现出不同的三向分化能力：8B和11F细胞体外成骨和成脂肪能力明显优于杂合细胞,而11D细胞略低于杂合细胞；除11D外,其它细胞系均能向软骨分化。转瓶动态培养能够实现克隆细胞的扩增。与静态培养系统中收获的细胞相比,在转瓶动态培养中收获的克隆和杂合细胞,能维持较好的集落形成能力和成骨成脂肪分化潜能。研究表明,可以从羊膜中分离获得间充质干细胞,但该细胞群为多种细胞形态构成的杂合细胞。通过克隆分析发现,Nanog-3和CD105高表达的克隆具有更强的三向分化潜能,并且克隆细胞可以通过转瓶动态培养实现规模化扩增。