地中海拟无枝菌酸菌U32 GlnR负调控ald转录的研究以及GlnR Box的发现与鉴定

来源 :中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态所 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:RSH1987
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地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)U32中有两条途径来同化铵,分别是谷氨酰胺合成酶/谷氨酸合酶(GS/GOGAT)途径和丙氨酸脱氢酶(AlaDH)途径。在氮源丰富的条件下,U32主要采用AlaDH途径,催化丙酮酸和氨生成丙氨酸来同化铵;而在氮源匮乏的条件下,U32则采用GS/GOGAT途径。俞浩博士等曾证明在氮源匮乏的条件下,GInR正调控GS编码基因——glnA的转录;本研究工作则发现GlnR同时还负调控丙氨酸脱氢酶编码基因——ald的转录,所以在U32中GlnR蛋白负责铵同化途径的调控。通过比较glnA和ald启动子中受GlnR保护的DNA序列发现了16-bp的保守序列,定义为GInR Box。GlnR Box在glnA启动子中是连续的,而在ald启动子中则被分开为两个8-bp的Boxl和Box2,间隔76个碱基。在体外通过原子力显微镜(AFM)实验证实了ald启动子可以形成一个DNAloop,在空间上将分开的Boxl和Box2连在一起,从而形成一个完整的GlnR Box,其中,ald基因主要的(也是受调控的)转录起始位点P2位于GInR Box2中。显然,GlnR蛋白通过结合到GlnR Box上从而阻碍了ald从P2位点起始的转录,这也解释了U32体内GlnR负调控ald转录的分子机制。在模式放线菌——天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)中也发现了类似的GlnR Box存在。在氮源贫瘠时,GlnR Regulon(Tiffert et al.,2008)中只有启动子中含有GlnR Box的基因才受到GlnR蛋白的调控,其余的基因则不受调控。利用GlnR Box在S.coelicolor基因组中找到了新的GlnR靶标基因——nasA,并证明了GlnR通过结合nasA启动子中的GlnRBox,从而正调控nasA的转录。因此,无论在A.mediterranei还是在S.coelicolor中,GInR都是通过结合GlnR Box来调控靶标基因的表达,从而负责整个铵同化(或氮代谢)的调控。
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