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ABC1(for Activity of bc1 complex)类蛋白激酶是近年来在植物中发现的一类新的非典型性激酶。在植物中研究较少,以往的研究表明,ABC1类蛋白激酶主要参与植物氧化胁迫过程。本实验室在水稻中克隆到了一个编码ABC1类蛋白激酶基因OsABC1K8,并得到了该基因的敲减转基因植株及过表达的转基因植株,在此基础上对水稻OsABC1K8基因的功能进行研究,着重探讨该基因在胁迫应答中的作用,并初步探究其可能的作用机理,主要取得以下结果: 1、利用Real time-PCR法检测OsABC1K8基因在水稻不同组织和器官中的表达水平,结果表明OsABC1K8的表达无组织特异性,在其根、茎、叶、剑叶、鞘、穗中均能检测到表达,其中在叶中表达水平较高。 2、利用Real time-PCR分析了野生型中花11在不同胁迫条件下OsABC1K8基因的表达水平,结果显示OsABC1K8基因的表达受ABA、冷、高盐和PEG等胁迫诱导下调表达。 3、通过构建p35S∷ OsABC1K8-GFP融合表达载体,与线粒体Marker基因共转到新鲜分离的水稻原生质体,共聚焦显微镜发现OsABC1K8基因编码的蛋白定位于线粒体。 4、在正常的培养条件下,WT、过表达、RNAi敲减转基因植株在各个生长时期均无明显差异。 5、萌发后的水稻种子用ABA处理5天统计苗长发现,OsABC1K8过表达转基因植株的苗长长于野生型植株,而野生型植株的苗长长于OsABC1K8敲减转基因植株,并且在一定范围内ABA的浓度越高,这种差异越明显。这说明,OsABC1K8基因可能参与了ABA的胁迫应答。 6、萌发后的水稻种子用ABA处理11天统计苗长、根长、侧根数以及鲜重发现,OsABC1K8过表达转基因植株的苗长、根长比野生型植株长、侧根数比野生型多、鲜重比野生型重,而野生型植株比OsABC1K8敲减转基因植株苗长和根长长,侧根数多、鲜重重。进一步说明,OsABC1K8过表达植株对ABA不敏感而敲减转基因植株对ABA敏感。推测OsABC1K8基因可能负调控ABA信号途径。 7、生长10天的水稻苗,干旱处理7小时后恢复3天统计各基因型植株的存活率发现,过表达植株的存活率显著低于野生型植株,野生型植株低于敲减转基因植株,这说明OsABC1K8过表达植株对干旱敏感,推测OsABC1K8基因在于旱胁迫应答过程中起到负调控的作用。 8、在NaCl处理条件下,OsABC1K8过表达转基因植株水稻种子的萌发率高于野生型植株,而野生型植株水稻种子的萌发率高于OsABC1K8敲减转基因植株,并且在一定范围内NaCl浓度越高萌发率的差异越明显。说明OsABC1K8类蛋白激酶可能参与了NaCl的胁迫应答。 9、利用Real time-PCR方法分析了各基因型植株在ABA处理3小时和8小时条件下ABA信号通路中相关转录因子的表达量变化,发现在ABA处理条件下相关转录因子的表达量在各基因型中均呈上调趋势,但各个基因型在干旱处理前后之间不存在显著的差异。我们推测,OsABC1K8可能不通过影响这些基因的表达来响应ABA信号途径。 10、利用Real time-PCR方法分析了各基因型植株在干旱处理3小时和7小时条件下相关胁迫应答基因的表达量变化,发现在干旱处理条件下这些基因的表达量在各基因型中均呈上调趋势,但各个基因型在干旱处理前后之间不存在显著的差异。我们推测OsABC1K8可能不通过影响这些基因的表达来参与干旱胁迫的应答。 以上结果表明,OsABC1K8基因参与盐、干旱和ABA胁迫应答。