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【目的】
乙型肝炎病毒(HBV)核苷酸类似物(NAs)耐药突变和免疫逃逸突变分别发生在病毒的逆转录酶区(RT, nt 130-1 161)与S区(nt 155-835)。本研究旨在通过临床大样本分析，明确慢性HBV感染患者中HBVRT基因经典耐药突变与S基因免疫逃逸相关突变的临床发生特点及其两类突变的发生是否相关。
【方法】
1.本论文的研究对象为2007年7月至2017年12月就诊于解放军总医院第五医学中心19440例接受NAs治疗的慢性HBV感染患者，均接受了HBV耐药突变检测(直接测序法)。收集患者临床资料和HBV直接测序信息，分为RT耐药突变阳性组和阴性组，分析HBVS基因中主要亲水区(major hydrophilic region, MHR)免疫逃逸相关突变并比较两组中HBVRT/S基因中耐药/免疫逃逸相关突变的临床发生特点。
2.对其中5例代表性MHR免疫逃逸相关突变(sA159V)患者动态血清样本进行动态检测分析，应用巢式PCR法扩增HBVRT/S基因，在直接测序法的基础上，进一步进行克隆测序法(≥20个克隆/样本)，分析RT基因耐药突变与S基因免疫逃逸相关突变的联系及其临床意义。
3.选取来源于同一患者的HBV野生型(wild type, WT)和7种不同的突变型克隆株，构建pTriEx-mod-1.1HBV真核表达载体重组质粒，提纯重组质粒并瞬时转染HepG2细胞，检测细胞上清HBsAg、HBVDNA水平以及抗病毒药物对病毒株抑制能力。
【结果】
1.19440例患者中RT耐药突变总检出率为35.92%(6 982/19 440)；RT耐药突变阳性组患者中MHR免疫逃逸相关突变总体检出率高于阴性组患者(23.32%vs.18.51%,P<0.05)；
2.RT耐药突变阳性组与阴性组比较显示，39种MHR免疫逃逸相关突变位点中有10种存在统计学差异(P<0.05)，其中RT耐药突变阳性组sQ101H/K/R,sS114A/L/T,sT118A/K/M/R/S/V,sP120A/L/Q/S/T,sT/I126A/N/P/S,sM133I/L/T,sC137W/Y,sG145A/R和sA159G/V突变位点检出率高于RT耐药突变阴性组患者检出率；
3.RT耐药突变阳性组患者中sA159V突变检出率高于RT耐药突变阴性组(1.95%(136/6 982)vs. 1.08%(134/12 458),P<0.05)，且与sA159V阴性患者相比，sA159V阳性患者中经典ADV、LAM/LdT和ETV耐药位点检出率更高(P<0.05)；
4.通过对5例sA159V突变患者随访中发现，抗病毒治疗前或者抗病毒治疗期间sA159V突变在患者体内持续存在，当抗病毒治疗改变用药策略或抗病毒治疗有效时，以sA159V突变与RT耐药突变同一病毒基因组上的耐药突变为主；
5.对代表性突变株表型耐药分析表明与缺乏sA159V的耐药突变株相比，含sA159V的LAM/ETV耐药突变株表现出明显的较低HBsAg水平，较高的HBVDNA水平，但对LAM/ETV敏感性没有显著变化。
【结论】
通过对迄今为止最大耐药患者样本量的分析，揭示了十种MHR免疫逃逸相关突变可能促进HBV耐药突变的发生。通过进一步研究发现，sA159V突变可通过降低HBsAg水平和增加病毒复制能力来提高RT耐药突变株对环境压力的适应能力。
乙型肝炎病毒(HBV)核苷酸类似物(NAs)耐药突变和免疫逃逸突变分别发生在病毒的逆转录酶区(RT, nt 130-1 161)与S区(nt 155-835)。本研究旨在通过临床大样本分析，明确慢性HBV感染患者中HBVRT基因经典耐药突变与S基因免疫逃逸相关突变的临床发生特点及其两类突变的发生是否相关。
【方法】
1.本论文的研究对象为2007年7月至2017年12月就诊于解放军总医院第五医学中心19440例接受NAs治疗的慢性HBV感染患者，均接受了HBV耐药突变检测(直接测序法)。收集患者临床资料和HBV直接测序信息，分为RT耐药突变阳性组和阴性组，分析HBVS基因中主要亲水区(major hydrophilic region, MHR)免疫逃逸相关突变并比较两组中HBVRT/S基因中耐药/免疫逃逸相关突变的临床发生特点。
2.对其中5例代表性MHR免疫逃逸相关突变(sA159V)患者动态血清样本进行动态检测分析，应用巢式PCR法扩增HBVRT/S基因，在直接测序法的基础上，进一步进行克隆测序法(≥20个克隆/样本)，分析RT基因耐药突变与S基因免疫逃逸相关突变的联系及其临床意义。
3.选取来源于同一患者的HBV野生型(wild type, WT)和7种不同的突变型克隆株，构建pTriEx-mod-1.1HBV真核表达载体重组质粒，提纯重组质粒并瞬时转染HepG2细胞，检测细胞上清HBsAg、HBVDNA水平以及抗病毒药物对病毒株抑制能力。
【结果】
1.19440例患者中RT耐药突变总检出率为35.92%(6 982/19 440)；RT耐药突变阳性组患者中MHR免疫逃逸相关突变总体检出率高于阴性组患者(23.32%vs.18.51%,P<0.05)；
2.RT耐药突变阳性组与阴性组比较显示，39种MHR免疫逃逸相关突变位点中有10种存在统计学差异(P<0.05)，其中RT耐药突变阳性组sQ101H/K/R,sS114A/L/T,sT118A/K/M/R/S/V,sP120A/L/Q/S/T,sT/I126A/N/P/S,sM133I/L/T,sC137W/Y,sG145A/R和sA159G/V突变位点检出率高于RT耐药突变阴性组患者检出率；
3.RT耐药突变阳性组患者中sA159V突变检出率高于RT耐药突变阴性组(1.95%(136/6 982)vs. 1.08%(134/12 458),P<0.05)，且与sA159V阴性患者相比，sA159V阳性患者中经典ADV、LAM/LdT和ETV耐药位点检出率更高(P<0.05)；
4.通过对5例sA159V突变患者随访中发现，抗病毒治疗前或者抗病毒治疗期间sA159V突变在患者体内持续存在，当抗病毒治疗改变用药策略或抗病毒治疗有效时，以sA159V突变与RT耐药突变同一病毒基因组上的耐药突变为主；
5.对代表性突变株表型耐药分析表明与缺乏sA159V的耐药突变株相比，含sA159V的LAM/ETV耐药突变株表现出明显的较低HBsAg水平，较高的HBVDNA水平，但对LAM/ETV敏感性没有显著变化。
【结论】
通过对迄今为止最大耐药患者样本量的分析，揭示了十种MHR免疫逃逸相关突变可能促进HBV耐药突变的发生。通过进一步研究发现，sA159V突变可通过降低HBsAg水平和增加病毒复制能力来提高RT耐药突变株对环境压力的适应能力。