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激酶活性是pk-1基因重要的生物学活性。本研究旨在探讨AcMNPVpk-1基因及其不同截短型序列表达蛋白的激酶活性水平,从而得出该基因的哪些功能域对蛋白磷酸化是必需的;为进一步阐明杆状病毒pk-1基因在病毒感染复制中的功能以及调控自身极晚期基因转录表达的机制打下基础。研究中发现,利用原核表达系统表达的外源pk-1基因及其截短型序列具有一定的激酶活性。通过比较,并结合Prosite数据库分析,推测出:PK-1蛋白具有一定的激酶活性,该蛋白的51-183区域可能是其功能域,该区域对pk-1基因的激酶活性是必需的。同时,pk-1基因及其不同截短型序列表达蛋白自身激酶活性不具有检测价值。本文共包括四章:
第一章对杆状病毒做了综述性介绍,包括杆状病毒的分类、形态结构、侵染与复制,重点介绍了杆状病毒相关的蛋白激酶及其研究现状,同时还介绍了杆状病毒的应用及本研究的目的等。
第二章克隆出了pk-1基因及其不同截短型序列,并将其连接到表达载体pMAL-c2x上;同时,对pk-1基因氨基酸序列进行生物信息学分析,得到相关的关键区域,为后续确定该基因功能域提供参考。
第三章实现了pk-1基因及其不同截短型序列的表达、纯化和激酶活性测定,并预测了pk-1基因的必需功能域。
第四章总结和讨论了本课题研究的结果,并对以后的研究做了展望。