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免疫功能紊乱,尤其是免疫功能障碍,是失血性休克发展为脓毒症、引起多器官功能障碍的一个关键环节。CD4~+T细胞功能障碍在失血性休克免疫功能障碍的发病过程中,扮演着重要角色。星状神经节阻滞(SGB)可明显提高失血性休克大鼠的存活率,减少器官功能障碍与结构损伤,但SGB对失血性休克后CD4~+T细胞功能有何影响,还不清楚。细胞自噬对细胞结构与功能的双向作用受到关注,且细胞自噬参与了包括CD4~+T细胞在内的多种免疫细胞的结构与功能变化,但失血性休克对CD4~+T细胞自噬是否产生影响,作用如何,尚不清楚。失血性休克后肠淋巴液(PHSML)回流是降低脾CD4~+T细胞功能、引起免疫功能障碍的一个因素,但PHSML与CD4~+T细胞自噬的关系尚不明确。为此,本研究应用清醒失血性休克模型,观察SGB对失血性休克大鼠脾脏结构及CD4~+T淋巴细胞功能与细胞自噬的影响,同时观察细胞自噬激活剂、静脉输入PHSML对SGB作用的影响,进一步从细胞水平观察SGB处理的大鼠PHSML(PHSML-SGB)对来自正常大鼠脾CD4~+T细胞活力、分泌功能与细胞自噬的作用。首先建立大鼠麻醉状态下的失血性休克模型(40±2 mm Hg维持60min,随后液体复苏),并分别实施SGB,留取失血性休克肠淋巴液(PHSML)和实施SGB的PHSML(PHSML-SGB),用于后续实验。42只大鼠在分别接受SGB或假SGB预处理后,随机分为Sham组、Sham+SGB组、Shock组、Shock+SGB组、Shock+3-MA组、Shock+SGB+RAPA组、Shock+SGB+PHSML组,每组6只。其中,Shock+3-MA、Shock+SGB+RAPA、Shock+SGB+PHSML三组大鼠在液体复苏的同时,分别静脉输入细胞自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、细胞自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)、PHSML。在液体复苏结束后3 h或相应时间点留取脾脏组织。部分组织用于观察组织结构变化(HE染色,n=3),部分组织提取CD4~+T淋巴细胞分离(免疫磁珠法,n=3)。随后,将提取纯化的CD4~+T淋巴细胞在体外接受Concanavalin A(Con A)刺激,检测CD4~+T淋巴细胞的增殖(CCK法)和产生细胞因子的能力(ELISA法)。结果发现,失血性休克引起大鼠脾脏组织结构发生明显变化,脾白髓和红髓边界模糊,白髓轮廓形态不规则且伴随炎性细胞浸润;SGB处理或3-MA治疗后,失血性休克大鼠脾脏白髓的轮廓基本恢复正常;而RAPA干预或回输PHSML在一定程度上抑制了SGB减轻失血性休克大鼠脾脏组织结构损伤的作用。同时发现,失血性休克后,CD4~+T细胞的增殖能力和分泌细胞因子IL-2、IL-4、TIPE2的能力明显下降;SGB处理或3-MA治疗明显恢复了失血性休克大鼠脾CD4~+T细胞增殖能力及分泌细胞因子的能力;而RAPA干预或回输PHSML抵消了SGB改善CD4~+T细胞增殖及分泌细胞因子能力的有益作用。为了进一步验证SGB是否通过肠淋巴途径发挥对失血性休克的有利作用,分离了正常大鼠脾脏CD4~+T细胞,分别应用PHSML、PHSML-SGB进行干预,检测CD4~+T细胞增殖(CCK法)、产生细胞因子IL-2、IL-4、TIPE2的能力、细胞自噬标志蛋白LC3 II/LC3 I、Beclin1表达、PI3K/AKT通路标志蛋白磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化AKT(p-AKT)的表达水平。结果显示,PHSML体外处理降低了CD4~+T细胞的增殖与分泌细胞因子的能力,上调了LC3 II/LC3 I、Beclin1表达,显著抑制了p-AKT、p-PI3K表达;相比之下,PHSML-SGB处理后的CD4~+T细胞的增殖、分泌细胞因子、LC3 II/LC3 I、Beclin1与p-AKT、p-PI3K蛋白表达均与PHSML的作用相反,向正常化方向发展;同时,3-MA处理明显抑制了PHSML对CD4~+T细胞上述指标的作用。上述研究从整体动物与细胞层面表明,SGB可明显减轻失血性休克大鼠脾组织损伤、改善CD4~+T淋巴细胞增殖与分泌细胞因子的功能,该作用是通过抑制PHSML介导的细胞自噬实现的。研究结果为针对细胞自噬、肠淋巴途径防治失血性休克的免疫功能障碍提供了一定的实验资料,也为扩展SGB的临床应用奠定了一定的实验基础。