论文部分内容阅读
目的:观察突触囊泡蛋白2A(synaptic vesicle protein 2A,SV2A)在难治性颞叶癫痫患者脑组织中的表达,探讨其在难治性癫痫中的作用。资料和方法:试验组33例均为临床确诊的难治性癫痫患者,发作类型符合1981年国际抗癫痫联盟(ILAE)有关癫痫发作分类的标准。其中男17例,女16例,年龄15～58岁,平均28.24±10.44((?)±s)岁;病程2～40年,平均14.36±8.88((?)±s)年;发作类型中部分性继发全身强直性、阵挛性或强直-阵挛性发作14例,复杂部分性发作14例,有多种发作类型(部分性、强直性、强直-阵挛性发作)5例。对照组共有9例,全部为脑外伤后手术中获得。其中男4例,女5例,年龄14～51岁,平均34.56±12.55((?)±s)岁。将手术切除取得的脑组织部分标本立即放于液氮(-196℃)中冷冻保存以备作western blot,其他标本置于4%多聚甲醛中固定48小时(4℃),石腊包埋切片,常温保存备用。采用免疫组织化学,免疫荧光和western blot方法检测脑组织标本中SV2A的表达水平,计算机图象分析系统测量平均光密度值(AOD),所测光密度值用均数±标准差((?)±s)表示,t检验进行统计学分析,以p<0.05作为有显著性差异。结果:1、免疫组化:SV2A主要在神经元的胞膜表达,神经胶质细胞和内皮细胞未见表达,阴性对照无阳性表达。难治性癫痫组的AOD值为0.1651±0.0564((?)±s),对照组为0.2347±0.0187((?)±s),两组间比较有显著差异(t=2.9473,p=0.0065)。2、免疫荧光:共聚焦显示SV2A在神经元表达,与对照组相比,SV2A蛋白在难治性癫痫组的表达较弱。3、western blot:定量分析显示难治性癫痫组的SV2A蛋白表达量显著低于对照组。结论:1、荧光双标证实SV2A主要在神经元的胞膜表达,蛋白定量证实SV2A在难治性癫痫组的表达量显著低于对照组。2、SV2A蛋白在难治性癫痫患者脑组织中的异常表达,提示SV2A可能通过调节神经递质的释放、轴突的生长等多种机制参与到难治性癫痫的形成与维持中。3、由于其在大脑皮质的广泛表达,且作为新型抗癫痫药物-左乙拉西坦-的结合位点,了解其在难治性癫痫中的表达,为研究难治性癫痫发病的分子机制及了解左乙拉西坦的抗癫痫作用奠定基础。