哈萨克药阿尔泰瑞香不同提取物对人食管癌Eca-109细胞的体外抑制作用

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目的:采用现代细胞分子生物学实验技术,初探阿尔泰瑞香提取物抗食管癌Eca-109细胞作用机制,为哈萨克药阿尔泰瑞香的后期研究提供依据。方法:将阿尔泰瑞香三种提取物不同浓度,依次作用于人食管癌Eca-109细胞,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)测定Eca-109细胞的增殖抑制率;通过计算细胞增殖抑制率,分析阿尔泰瑞香提取物对人食管癌细胞系Eca-109细胞增殖活性的影响。应用倒置荧光显微镜技术,观察细胞生长状况及形态学变化。运用流式细胞术,检测细胞周期及细胞凋亡率,探讨阿尔泰瑞香对人食管癌Eca-109细胞的增殖抑制的作用及机制。采用蛋白免疫印迹技术及实时荧光定量PCR技术对细胞内的PPARγ基因的表达水平进行分析,探讨阿尔泰瑞香不同提取物抗人食管癌Eca-109细胞的作用机制及与基因表达调控的关系。结果:阿尔泰瑞香三种提取物对人食管癌Eca-109细胞具有明显的抑制细胞生长的作用,与对照组比较,差异有统计学意义(P﹤0.05)。人食管癌Eca-109细胞经阿尔泰瑞香三种提取物处理后细胞形态发生变化。用阿尔泰瑞香三种提取物不同浓度处理人食管癌Eca-109细胞后处于S期的细胞数显著升高,跟空白对照组比较,差异具有统计学意义(P﹤0.05);G0/G1期的细胞数明显下降,与空白对照组比较,差异亦具有统计学意义(P﹤0.05)。人食管癌Eca-109细胞经阿尔泰瑞香三种提取物不同浓度处理后,检测细胞凋亡率,结果与空白对照组比较药物干预后癌细胞凋亡率明显增大,差异有统计学意义(P﹤0.05)。人食管癌Eca-109细胞经阿尔泰瑞香提取物不同浓度处理不同时间(24 h,48 h,72 h)后采用荧光定量PCR法检测细胞内PPARγmRNA表达量,结果经三种提取物处理癌细胞后细胞内PPARγmRNA表达量均显著增加(P﹤0.05)。阿尔泰瑞香乙酸乙酯提取物干预24 h,48 h,72 h后细胞内PPARγmRNA表达量增高(P﹤0.05)。阿尔泰瑞香正己烷、甲醇提取物干预48 h、72 h细胞内PPARγmRNA表达量增高(P﹤0.05),而干预24 h后PPARγmRNA表达量未见明显变化(P>0.05)。Western Blot结果显示经阿尔泰瑞香提取物干预后细胞内PPARγ蛋白表达增高(P﹤0.05),干预48 h后的上调作用较强。结论:阿尔泰瑞香提取物抑制人食管癌Eca-109细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,上调细胞内PPARγ基因表达。
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