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本实验通过利用单链DNA检测探针能以非共价的方式缠绕于单壁碳纳米管(SWNTs)表面的特性,设计了一种检测特异性好且操作简单、便宜的检测方法用以实现对病原菌的快速检测。传统的病原菌检测技术需要进行平皿培养,时间长并且缺乏准确性。而在没有准确检测诊断结果的情况下,不谨慎的采用抗生药剂的治疗将导致药物副作用的出现甚至是抗生素抗性菌株的出现。因此,对病原菌提供快速、准确的检测在临床上很有意义。虽然PCR技术在该病原菌快速检测领域已得到广泛的应用,但其定量不准确,操作过程复杂且对操作环境要求高。电化学和光学技术近年来也己广泛地应用于病原菌快速检测领域,这些方法是利用核酸的杂交互补配对的原理,而不是采用以酶为基础的目标序列扩增的原理进行检测,所以这些分子检测手段可以直接于临床样品中检测病原菌,使得这些技术在平台上要优于基于PCR的检测技术。但是依据电化学手段的检测技术涉及复杂的修饰过程和洗脱过程;而采用光学手段的检测技术则涉及昂贵的荧光基团的标记,复杂的探针设计和合成,荧光和淬灭基团的优化设计以及复杂的准备和操作步骤。这些操作不仅复杂,而且昂贵。一种利用DNA酶的独特性质而开发出来的分析手段已被应用于分子检测领域。DNA酶作为一种催化性的标记分子具有在该领域极有价值的优点。首先,它的催化能力稳定,在经过反复变性和复性条件下其均保持着结合能力的稳定和催化能力的稳定。其次,它的合成和准备便宜,不需要进行复杂的探针设计也不需要价格昂贵且复杂的荧光探针标记和繁琐的修饰过程。使用DNA检测探针进行细菌检测时,DNA探针容易受到细胞内的限制性内外切酶系的消化和降解,从而导致检测探针的数量的减少和检测灵敏度的下降。而碳纳米管被报道具有对DNA的保护作用。我们利用其保护特性设计了一种灵敏度高、操作方便的分子检测方法用于检测病原菌。该研究主要开展的工作为:1.通过使用生物信息学手段,利用NCBI数据库设计金黄色葡萄球菌的DNA分子检测探针并且标记上DNA酶序列(PS2.M)。在适当的孵育条件下,将该检测探针PO与SWNTs构建成一种由探针PO和SWNTs所组成的检测复合物PO/SWNTs。通过使用分光光度计考察PO/SWNTs检测复合物的检测动力学特征、检测灵敏度、以及检测特异性。2.利用DNA碱基互补配对的特点,设计出一条与检测探针PO部分互补配对的阻碍链序列P2。在同样的孵育条件下,探针PO与阻碍链P2形成另一种检测复合物PO/P2。考察该PO/P2检测复合物的检测动力学特征。3.通过PAGE实验研究SWNTs在酶切条件下对探针PO的保护性能。分别考察检测复合物PO/SWNTs和PO/P2在酶切环境中的检测动力学特征、检测灵敏度、以及检测体系的检测稳定性。通过比较两者的检测性能以验证因为SWNTs的存在,检测探针PO具有更好的检测性能,且在酶和细胞破碎液环境中具有更低的检测灵敏度和更好的检测稳定性。4.利用PO/SWNTs检测复合物完成了对金黄色葡萄球菌的快速检测。