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目的:通过检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者经控制性超排卵治疗后卵巢黄素化颗粒细胞和卵泡液中HOXA9mRNA和蛋白的表达情况,探讨其在颗粒细胞凋亡及卵泡发育过程中的意义。
方法:选择接受IVF-ET或ICSI治疗的PCOS患者35例;另选择同期因男性不育而接受ICSI治疗的卵巢功能正常的患者42例为对照组。所有实验对象均于手术当日回收卵子后留取无明显血染卵泡液,提取颗粒细胞。运用间接免疫荧光试验(IFA)、蛋白质印迹(Western blot)技术检测黄素化颗粒细胞中HOXA9蛋白的表达;采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测黄素化颗粒细胞中HOXA9mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测卵泡液中HOXA9、IGF-I和IGF-Ⅱ的表达。
结果:
1.黄素化颗粒细胞检测结果显示:IFA分析HOXA9蛋白在PCOS组和正常对照组均呈阳性染色,主要定位于颗粒细胞的细胞浆和细胞核。Western bloT分析:
PCOS组颗粒细胞HOXA9蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01);RT-PCR分析:
PCOS组颗粒细胞HOXA9mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.01)。组间差异均具有显著性意义。
2.卵泡液检测结果显示:卵泡液PCOS组HOXA9表达水平低于对照组(P<0.01);PCOS组IGF-I和IGF-Ⅱ的表达水平均高于正常对照组(P<0.01)。差异均有显著性意义。卵泡液中HOXA9 与IGF-I(r 正常组=-0.321,p<0.05;rPCOS组=-0.405,p<0.05)和IGF-Ⅱ均呈负相关(r 正常组=-0.646,p<0.01;rPCOS组=-0.734,p<0.01)。
结论:该研究结果提示,卵泡液和黄素化颗粒细胞中均存在HOXA9的表达;HOXA9与IGFs 负相关。提示HOXA9 与PCOS的发病有关,值得深入研究。