胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种(Pectobacteriumcarotovorumsubsp.Carotovorum，以下简称Pcc)是果胶杆菌属(Pactobacterium)中寄主范围最为广泛的植物病原细菌之一，引起多种作物的软腐病大面积发生，造成巨大经济损失。因此，Pcc在农业生产的经济意义扮演着十分重要的的角色。该病原细菌会通过感应环境信号启动机体适当应答从而适应环境变化，达到在宿主体内生存繁殖的目的，并由此引发与寄主植物的致病或共生互作。双组分信号转导系统在病原菌的信号感应过程中有非常重要的作用。大量研究结果表明，病原菌双组分系统还对宿主体内外环境的代谢性适应、渗透压变化的生理应答等过程存在基于典型组成结构的多种调控机制。本研究针对胡萝卜软腐果胶杆菌PccS1中的3个双组分系统反应调节基因，构建缺失突变体及互补菌株，并将突变菌株和野生菌株的生物学表型分析，进行差异比较，为研究反应调节因子对PccS1致病力的影响调节机制提供基础数据。
　　双组分系统普遍存在于原核及真核生物中，很大程度上影响着病原菌的致病力。基因组数据分析表明PccS1中存在三个反应调节子基因。为了探究这三个反应调节子基因在PccS1中的致病相关功能，本研究运用同源重组的方法构建了胡萝卜软腐果胶杆菌PccS1中的三个反应调节子基因的单基因缺失突变体△PccS1_3334，△PccS1_1979和△PccS1_3961，及其互补菌株、过表达菌株或空载菌株，并对三个反应调节子基因进行同时缺失突变，获得了三基因敲除突变体。生物学表型分析结果表明:反应调节子单基因敲除突变体、三基因敲除突变体的体外培养生长速率与野生型基本一致，说明PccS1中双组分系统的反应调节基因不是通过调控生长途径来调节细菌的行为;与野生型比较，寄主毒力测定结果显示反应调节子基因缺失突变体的致病能力丧失程度极显著;△PccS1_3334的胞外蛋白酶分泌水平极显著降低，其碳青霉烯抗生素合成活性、生物膜形成能力、沉降性及游动能力均显著下降;寄主植物胼胝质沉积检测结果也显示:与野生型相比较，PccS1_3334缺失突变菌株在本氏烟和马铃薯的叶片上均引起胼胝质积累明显增加。而△PccS1_1979和△PccS1_3961除了致病力下降外，其它表型上与野生型比较均无差异，表明这两个反应调节子基因与PccS1_3334对致病力的调控机制存在差异，具体为何种机制有待进一步研究。
　　此外，本研究还利用Westernblot方法检测了△PccS1_3334、△PccS1_1979和△PccS1_3961对Ⅵ型分泌系统效应蛋白质Hcp外泌及负调控蛋白质HexA外泌的影响，结果显示:△PccS1_3334中，Hcp的分泌受到了显著的抑制，证明了PccS1_3334参与了对T6SS外泌功能的调控;反应调节子基因缺失突变对于HexA的外泌则无影响。
　　PccS1中三个反应调节子基因的致病相关功能分析表明:三个不同调节子对PccS1致病力的调控机制存在差异，且明确了其中PccS1_3334的多种调控路径，为进一步地开展相关研究奠定了基础。