肾母细胞瘤是小儿最常见的肾肿瘤，占小儿所有恶性肿瘤的5－6％。它由未分化的胚基、上皮和间质成分组成，其组织来源和发生学一直受到众多学者的关注。近年来的研究发现，肾发育过程中的胚基残留，分化障碍可能是肾母细胞瘤发病的原因之一。端粒酶的活性在许多肿瘤组织中检测到，并被认为与肿瘤的发生，发展密切相关。维生素A是参与生物体胚胎发育，生殖细胞分化和正常生理稳态的重要物质。因维生素A缺乏所致的失明、感染、免疫力下降和细胞癌变率增高等现象已经引起了人们对维生素A类物质在肿瘤治疗和预防方面的极大兴趣，成为了肿瘤研究的热点。本研究以寻找人肾母细胞瘤发生的相关因素为出发点，以端粒酶的表达为线索，探索其在肾发育和肾母细胞瘤发生过程中的作用轨迹以及化疗对人肾母细胞瘤端粒酶表达的影响；以维生素A缺乏饮食为干预条件，观察其对药物诱导的肾母细胞瘤的成瘤率和端粒酶表达的影响，来探讨维生素A对肿瘤形成的作用，证实胚胎发育与肾母细胞瘤的关系。第一部分 人肾母细胞瘤和胎儿肾的端粒酶表达材料和方法将实验对象分成三组，肿瘤组：外科手术切除的肾母细胞瘤新鲜标本共18例，术前均未化疗。胎儿肾组：取自国际妇幼保健院计划生育自愿药物引产的正常胎儿肾，按胎龄分成3小组：12～20周，21～28周，29～36周，每小组各8例。对照组：取自因肾积水或重复肾手术患儿的正常肾组织的活检标本，共8例。将上述标本切片，用端粒酶－RNA原位杂交试剂盒进行检测，并通过图像分析系统测定阳性反应区域的强度值，以进行定量。结果肿瘤组的端粒酶－RNA阳性率为72.2%（13/18），明显高于对照组0％（0/8），P＝0.002。13例端粒酶-RNA表达阳性的肾母细胞瘤标本中，胚基成分和上皮成分的表达强度相近，分别为8.1077±0.1935，8.0308±0.2810，差别无统计学意义。而它们的表达强度均远高于间质成分（4.6000±0.2582），差别具有显著性。在18例人肾母细胞瘤的瘤旁肾中，有8例（44％）可检测到肾源性剩余（Nephrogenic Rest, NR），其中有7例有端粒酶－RNA的阳性表达，阳性率为39％（7/18）。将NR的形态和表达强度与其相对应的肾母细胞瘤中三种成分的形态和表达强度进行比较，发现从形态上，NR与肾母细<WP=4>胞瘤的胚基成分和上皮成分及其相似。从表达强度上，7例标本中的NR的阳性强度为7.8857±0.2545，胚基成分的阳性强度为8.1143±0.1952，上皮成分的阳性强度为8.0000±0.2309，间质成分的阳性强度为4.6000±0.3266。统计结果提示NR的端粒酶-RNA表达强度与胚基成分、上皮成分无差异，而与间质成分有显著差异。在胎儿肾中，随着胎龄的增大，端粒酶的表达从皮质逐渐移向髓质，表达强度逐渐减弱。第二部分 术前化疗、临床分期及组织学分型等对肾母细胞瘤端粒酶表达的影响材料和方法外科手术切除的肾母细胞瘤新鲜标本（术后病理证实），共24例。男14例，女10例。年龄分布：2岁以内13例，2岁以上11例。按NWTS标准进行临床分期，其中Ⅰ期4例，Ⅱ期8例，Ⅲ期9例，Ⅳ期3例，Ⅴ期0例。良好组织学类型（FH）15例，不良组织学类型（UH）9例。18例未接受术前化疗而直接手术，6例接受术前化疗。将上述标本切片，用端粒酶－RNA原位杂交试剂盒进行检测。结果24例肾母细胞瘤标本中，端粒酶-RNA阳性表达16例，阳性率达66.7％。其中术前未化疗组13例阳性，占该组病人的72.2％（13/18）。术前化疗组3例阳性，占该组病人的50％（3/6），经检验差别无统计学意义。比较术前未化疗组和术前化疗组的肾母细胞瘤标本中胚基成分，上皮成分和间质成分中的端粒酶-RNA表达的阳性强度，经过t检验，发现胚基成分的表达强度在术前化疗组明显低于术前未化疗组，上皮成分的表达强度在术前化疗组亦明显降低，间质成分的表达强度无明显改变。分析不同年龄，性别，组织学分型，临床分期，化疗与否与端粒酶-RNA表达的相关性，结果提示年龄，性别，组织学分型，临床分期，化疗对端粒酶-RNA表达无明显的影响。第三部分 维生素A对DMH诱导的鼠肾母细胞瘤成瘤和端粒酶表达的影响材料和方法建立DMH诱导的Wistar幼鼠的肾母细胞瘤动物模型。雌性Wistar大鼠60只，出生18－20d，体重40－50g。将浓度为0.35%DMH按200mg/kg的剂量于左季肋一次皮下注射。将其平均分成二组，分别给予正常饮食和早期维生素A缺乏饮食（即前4个月的无维生素A饮食，后8个月的正常饮食）。另取30只相当体重和年龄的Wistar大鼠，左季肋皮下一次注射相当体积的0.5%EDTA生理盐水，给予正常饮食，作为对照组。分别于实验的第1，60，120，365天称重，记录体重变化曲线；实验第120天测定血清维生素A<WP=5>浓度；第365天结束实验，观察三组实验大鼠的肾母细胞瘤的生成率，肾源性剩余检出率以及鼠肾母细胞瘤的端粒酶-RNA表达。结果正常饮食的两组大鼠（对照组和正常饮食实验组）生长发育正常，维生素A缺乏饮食实验组出现了生长落后，角膜溃疡，前肢瘫痪的表现，经补充正常饮食后症状改善，体重追赶。对照组和正常饮食实验组血清维生素A浓度分别为2.64±0.53μmol/L和2.60±0.53μmol/L，差别