论文部分内容阅读
目的:检测TGF-β信号通路相关因子在幼兔早期激素性股骨头坏死组织中的表达,比较不同剂量的醋酸泼尼松龙对人成骨细胞中TGF-β信号通路相关因子表达的影响,探讨TGF-β信号通路与激素性幼兔股骨头坏死的关系。方法:1.60只8周龄的新西兰白兔,体重1.5~2.0kg。按随机表法将实验动物分为2组:实验组(n=48),醋酸泼尼松龙7.5mg/kg双侧臀肌交替注射,每周两次,共注射8周;对照组(n=12),于同样部位相同频次注射等体积生理盐水,为预防感染,每周注射一次青霉素钠5万U/只。第8周注射完后于第8周末行CT检查并处死所有实验动物,并取出双侧股骨头标本。Elisa法检测TGF-β信号通路相关因子TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3在股骨头中的表达,RT-PCR检测转录因子Runx2在股骨头中的表达,比较各组中的表达差异。2.体外培养人成骨细胞并传代,激素干预组:加入10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L醋酸泼尼松龙;TGF-β信号通路抑制剂组:浓度为5μmol/L SB 431542处理;TGF-β信号通路激活剂组:加入10μM SRI-011381盐酸盐;空白对照组,保证各组中DMSO浓度为0.1%,分别培养72h,应用Elisa、PT-PCR检测方法检测TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3及转录因子Runx2在各组中的表达情况,同时应用细胞流式术检测6组细胞凋亡率。结果:1.实验组造模过程中处死6只,存活32只,发病6只,未发病26只,造模成功率为18.75%(6/32)。Elisa结果示:TGF-β1(pg/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为77.12±14.62、90.17±11.90、126.14±25.66,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=3.35,P<0.05;t=4.24,P<0.01);TGF-β2(pg/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为74.54±7.63、89.24±9.51、109.74±16.45,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=4.12、5.65,P<0.01);Smad2(ng/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为17.74±2.72、23.82±3.58、31.28±3.88,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=4.54、7.99,P<0.01);Smad3(ng/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为1.76±0.52、2.39±0.45、3.53±0.47,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=5.60、6.71,P<0.01)。PT-PCR结果示:Runx2在对照组、未发病组、发病组的相对表达量为1.02±0.17、1.27±0.14、1.72±0.11,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=7.60、8.91,P<0.01)。2.体外培养人成骨细胞,对照组、激素干预组:10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、TGF-β信号通路抑制剂组、TGF-β信号通路激活剂组各组细胞凋亡率(%)为:6.36±1.61、13.53±0.38、20.72±0.45、30.17±1.35、24.58±1.20、5.72±0.01,激素干预组、TGF-β信号通路抑制剂组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(F=288.55,P<0.01)。Elisa结果示:TGF-β1(ng/m L)在各组表达量为169.29±1.78、148.90±2.02、127.66±3.16、114.85±2.54、175.52±5.90、173.33±3.86,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=161.17,P<0.01);TGF-β2(ng/m L)在各组表达量为313.08±5.27、286.63±5.17、231.45±13.69、159.01±3.45、311.35±11.48、310.78±6.22,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=163.74,P<0.01);Smad2(ng/m L)在各组表达量为395.66±3.61、369.06±2.30、342.75±1.81、293.30±3.05、312.39±4.45、399.13±6.09,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,抑制剂组与对照组相比表达量降低,差异有统计学意义(F=390.35,P<0.01);Smad3(ng/m L)在各组表达量为89.71±0.79、85.10±0.87、78.19±0.82、67.67±0.60、82.32±1.12、90.14±0.44,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,抑制剂组与对照组相比表达量降低,差异有统计学意义(F=330.07,P<0.01)。PT-PCR结果示:Runx2在各组细胞中的相对表达量为1.00±0.15、0.73±0.06、0.57±0.07、0.28±0.10、0.51±0.04、1.45±0.29,激素干预组和抑制剂组与对照组比较相对表达量下降,激活剂组与对照组比较相对表达量上升,差异有统计学意义(F=25.47,P<0.05)。结论:糖皮质激素可以通过下调TGF-β信号通路的表达促进体外培养人成骨细胞的凋亡;在幼兔激素性股骨头坏死模型中,TGF-β信号通路表达上调,可能具有延缓股骨头骨组织坏死和/或修复坏死骨组织的作用。