TGF-β信号通路相关因子在幼兔激素性股骨头缺血坏死模型中的表达及意义

来源 :遵义医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cuitlcm
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目的:检测TGF-β信号通路相关因子在幼兔早期激素性股骨头坏死组织中的表达,比较不同剂量的醋酸泼尼松龙对人成骨细胞中TGF-β信号通路相关因子表达的影响,探讨TGF-β信号通路与激素性幼兔股骨头坏死的关系。方法:1.60只8周龄的新西兰白兔,体重1.5~2.0kg。按随机表法将实验动物分为2组:实验组(n=48),醋酸泼尼松龙7.5mg/kg双侧臀肌交替注射,每周两次,共注射8周;对照组(n=12),于同样部位相同频次注射等体积生理盐水,为预防感染,每周注射一次青霉素钠5万U/只。第8周注射完后于第8周末行CT检查并处死所有实验动物,并取出双侧股骨头标本。Elisa法检测TGF-β信号通路相关因子TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3在股骨头中的表达,RT-PCR检测转录因子Runx2在股骨头中的表达,比较各组中的表达差异。2.体外培养人成骨细胞并传代,激素干预组:加入10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L醋酸泼尼松龙;TGF-β信号通路抑制剂组:浓度为5μmol/L SB 431542处理;TGF-β信号通路激活剂组:加入10μM SRI-011381盐酸盐;空白对照组,保证各组中DMSO浓度为0.1%,分别培养72h,应用Elisa、PT-PCR检测方法检测TGF-β1、TGF-β2、Smad2、Smad3及转录因子Runx2在各组中的表达情况,同时应用细胞流式术检测6组细胞凋亡率。结果:1.实验组造模过程中处死6只,存活32只,发病6只,未发病26只,造模成功率为18.75%(6/32)。Elisa结果示:TGF-β1(pg/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为77.12±14.62、90.17±11.90、126.14±25.66,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=3.35,P<0.05;t=4.24,P<0.01);TGF-β2(pg/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为74.54±7.63、89.24±9.51、109.74±16.45,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=4.12、5.65,P<0.01);Smad2(ng/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为17.74±2.72、23.82±3.58、31.28±3.88,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=4.54、7.99,P<0.01);Smad3(ng/m L)在对照组、未发病组、发病组的表达量为1.76±0.52、2.39±0.45、3.53±0.47,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=5.60、6.71,P<0.01)。PT-PCR结果示:Runx2在对照组、未发病组、发病组的相对表达量为1.02±0.17、1.27±0.14、1.72±0.11,发病组与未发病组、对照组比较,差异均有统计学意义(t=7.60、8.91,P<0.01)。2.体外培养人成骨细胞,对照组、激素干预组:10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、TGF-β信号通路抑制剂组、TGF-β信号通路激活剂组各组细胞凋亡率(%)为:6.36±1.61、13.53±0.38、20.72±0.45、30.17±1.35、24.58±1.20、5.72±0.01,激素干预组、TGF-β信号通路抑制剂组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(F=288.55,P<0.01)。Elisa结果示:TGF-β1(ng/m L)在各组表达量为169.29±1.78、148.90±2.02、127.66±3.16、114.85±2.54、175.52±5.90、173.33±3.86,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=161.17,P<0.01);TGF-β2(ng/m L)在各组表达量为313.08±5.27、286.63±5.17、231.45±13.69、159.01±3.45、311.35±11.48、310.78±6.22,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(F=163.74,P<0.01);Smad2(ng/m L)在各组表达量为395.66±3.61、369.06±2.30、342.75±1.81、293.30±3.05、312.39±4.45、399.13±6.09,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,抑制剂组与对照组相比表达量降低,差异有统计学意义(F=390.35,P<0.01);Smad3(ng/m L)在各组表达量为89.71±0.79、85.10±0.87、78.19±0.82、67.67±0.60、82.32±1.12、90.14±0.44,激素干预组与对照组比较表达量呈剂量依赖性降低,抑制剂组与对照组相比表达量降低,差异有统计学意义(F=330.07,P<0.01)。PT-PCR结果示:Runx2在各组细胞中的相对表达量为1.00±0.15、0.73±0.06、0.57±0.07、0.28±0.10、0.51±0.04、1.45±0.29,激素干预组和抑制剂组与对照组比较相对表达量下降,激活剂组与对照组比较相对表达量上升,差异有统计学意义(F=25.47,P<0.05)。结论:糖皮质激素可以通过下调TGF-β信号通路的表达促进体外培养人成骨细胞的凋亡;在幼兔激素性股骨头坏死模型中,TGF-β信号通路表达上调,可能具有延缓股骨头骨组织坏死和/或修复坏死骨组织的作用。
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