目的:筛选靶向PLK1 PBD的抗肿瘤小分子抑制剂,对其抗肿瘤效果进行体外评价,为抗肿瘤药物提供先导化合物。方法:通过蛋白提纯技术对PLK1蛋白进行纯化;利用荧光偏振模型初筛PLK1 PBD抑制剂;通过MTT法寻找初筛阳性化合物的敏感细胞系;利用流式细胞仪检测化合物对细胞周期和凋亡的影响;通过分子对接技术探讨化合物与PLK1 PBD结合方式;利用划痕实验测定化合物对肿瘤细胞迁移的影响。结果:通过蛋白纯化技术得到浓度0.723mg/mL的PLK1 PBD重组蛋白。利用荧光偏振模型使用高通量筛选方法筛选国家重点实验室微生物库的约40000个化合物,定向获得全新结构的化合物6507G11和1097C11。通过MTT实验发现小分子抑制剂6507G11和1097C11对8株肿瘤细胞具有明显的细胞毒性,在HCT-116细胞上IC50值分别为(5.38±0.16)μM和(8.43+0.58)μM。流式细胞仪检测细胞周期表明6507G11和1097C11可以明显地使周期同步化的HCT-116细胞发生剂量依赖性的G2/M期阻滞,延迟细胞周期进程。AnnexinV/PI双染实验发现,6507G11和1097C11可以明显地引发HCT-116细胞剂量依赖性的凋亡,6507G11在浓度达到15μM时晚期凋亡细胞数达到总细胞数的90.61%,1097C11在浓度达到25μM时晚期凋亡细胞数达到总细胞数的77.02%;细胞划痕实验证明小分子抑制剂6507 G11和1097C11能够抑制HCT-116细胞的迁移,并呈时间及浓度依赖性;分子虚拟对接表明化合物6507G11和1097C11与PLK1 PBD的结构域具有很好的结合性。结论:得到纯化度较高的PLK1 PBD蛋白,小分子抑制剂6507G11和1097C11具有较好的抗肿瘤活性,并有望成为靶向PLK1 PBD的抗肿瘤先导化合物。