蛋白酶亦称为蛋白质水解酶,是酶类的一种,在生理和病理过程中发挥着非常重要的作用,如蛋白质的消化、血液的凝固和细胞的凋亡等。胰蛋白酶是蛋白酶中一种典型的酶,是胰腺细胞产生的一种非常重要的消化性蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶,具有很强的专一性,可以切断精氨酸或赖氨酸C末端的羧基所形成的肽键,在控制胰腺外分泌功能中扮演着非常重要的角色。人体中的胰蛋白酶作为一种可靠的、特定的生物信息分子可用于胰腺功能及其病理变化的监测。因此,建立简单、灵敏、方便的检测胰蛋白酶的分析方法对相关疾病的诊断和治疗以及胰蛋白酶抑制剂的筛选具有非常重要的意义。细胞色素C（cytochrome c）是一种非常重要的电子转移蛋白,在线粒体呼吸链中发挥着非常重要的作用。细胞色素C可作为胰蛋白酶的天然底物。在胰蛋白酶的作用条件下,细胞色素C发生水解,此时其分子结构中的血红素就会以血红素-多肽链共轭的形式游离到溶液中,游离在溶液中的血红素作为一种高效的催化剂可以催化H₂O₂与其他物质之间的氧化还原反应。本论文围绕胰蛋白酶检测及其抑制剂筛选的重要意义,建立了用于胰蛋白酶检测及其抑制剂筛选的两种分析方法。一、以细胞色素C为酶作用的天然底物,3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）为显色剂,建立了胰蛋白酶检测及其抑制剂筛选的比色分析法。细胞色素C本身很难催化H₂O₂氧化TMB,当加入胰蛋白酶后,胰蛋白酶就会将细胞色素C水解成小的多肽碎片,细胞色素C分子结构中的血红素就会以血红素-多肽链共轭的形式释放到溶液中。此时,释放的血红素-多肽链共轭物迅速催化H₂O₂氧化TMB使溶液变为蓝色,该溶液在652 nm处有较强的吸收峰。基于以上实验现象建立了检测胰蛋白酶的比色分析法,该比色分析法的线性范围为5-2000 ng/mL,检出限为4.5 ng/mL。用肉眼可以视觉感知胰蛋白酶的最低浓度为50.0 ng/mL.该方法可成功应用于人尿液中胰蛋白酶含量的测定及其抑制剂的筛选,这表明该分析方法在临床诊断和药物研发方面具有很大的应用潜能。二、以细胞色素C为酶作用的天然底物,硫胺素为荧光底物,建立了用于胰蛋白酶检测及其抑制剂筛选的荧光分析法。硫胺素本身没有荧光,其氧化产物脱氢硫胺素在432 nm处有较强的荧光。当在细胞色素C中加入一定量的胰蛋白酶后,细胞色素C的水解产物血红素-多肽链共轭物就会迅速催化H₂O₂氧化硫胺素,硫胺素的氧化产物就会在432 nm处产生较强的荧光,基于以上实验现象建立了用于胰蛋白酶检测的荧光分析法。该分析方法的线性范围为0.5-20.0μg/mL,检出限为125.0ng/mL。该方法可用于多种胰蛋白酶抑制剂的筛选。本论文所创建的两种胰蛋白酶检测的分析方法具有操作简单、灵敏度高、无需标记、选择性好等优点,可用于实际样品中（人尿液）胰蛋白酶含量的测定及其抑制剂的筛选。