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烟草特有亚硝胺(TSNA,Tobacco-specific nitrosamines)是一组只存在于烟叶、烟制品和烟气中的致癌物质。其合成前体物质是烟草生物碱、硝酸盐和亚硝酸盐。许多研究表明调制前的青烟不含TSNA,TSNA的合成多在晾制后期逐步积累。烟叶中有足够的烟碱用来形成TSNA,亚硝酸盐的积累是影响TSNA积累的主要因素。在收获期绿色烟叶和烘烤前期,没有或含有少量的亚硝酸盐,亚硝酸盐在烘烤期逐渐增加并且与TSNA的积累正相关。目前已有多种方法降低TSNA的含量,但都存在一定的局限。利用微生物降解TSNA是新的研究领域。反硝化细菌(denitrifying bacteria)通过诱导产生硝酸还原酶和亚硝酸还原酶对硝酸盐和亚硝酸盐进行还原。从45个反硝化细菌菌株中筛选出具有较强反硝化作用能力的菌株,并对目的菌株的最适培养基、生长温度及好气性进行测定,为反硝化细菌的利用提供依据。以自动化学分析仪检测Giltay液体培养基中的含氮量,测定菌株的反硝化作用能力。在45个供试菌株中,B88和B237菌株能够较好地降解培养基中的硝酸盐和亚硝酸盐,产气早,速度快,3d~4d产气达到高峰,含氮量明显降低,表明其反硝化作用能力较强。B88和B237菌株是好气性的,生长受氧气供应量的限制,CO2含量(20%)的提高,对菌株的生长具有较强抑制作用。在牛肉浸膏蛋白胨培养基、反硝化细菌培养基、YB培养基等培养基中,YB培养基最适合B88和B237菌株生长。B88和B237菌株最适生长温度为30℃,在YB培养基中生长的最高浓度:B88为6.1×10~8个/mL;B237为1.54×10~8个/mL。利用分子生物学技术通过菌株16S rDNA对两个菌株进行鉴定,结果两个菌株与枯草芽孢杆菌同源性很高,属于芽孢杆菌属,命名为Bacillus subtilis B88和Bacillus subtilis B237,GenBank登陆号分别为DQ010109和DQ517306。利用微生物降解TSNA在国内外的报道中还不多见,利用反硝化细菌菌悬液处理烟丝,反硝化细菌利用烟丝中的硝酸盐和亚硝酸盐诱导产生硝酸还原酶和亚硝酸还原酶,降解烟丝中硝酸盐和亚硝酸盐的含量,从而降低其中TSNA的含量。这种方法简单易行,费用低,作用产物挥发,对烟丝的质量影响很小,不会造成对烟丝的污染。B88、B237菌株是筛选出来具有较好反硝化作用的菌株,试验结果表明,菌株在好氧条件下不能降解TSNA,增加湿度能促进TSNA的合成。菌悬液只在微厌氧条件下才能起反硝化作用,