尼莫地平治疗大鼠脊髓损伤的临床前研究目的:脊髓损伤是一种极具破坏性的疾病,可导致严重的运动、感觉和自主神经功能障碍。最初的创伤会导致持续的级联继发性损伤,包括细胞凋亡、缺血、血管痉挛、离子稳态失调和炎症反应,这些损伤过程都能促使损伤范围扩大并导致功能恶化。尼莫地平是一种L/T型钙通道阻滞剂,已被美国食品和药物管理局批准用于蛛网膜下腔出血的治疗。尼莫地平的作用主要包括特异性中枢神经系统血管舒张作用并能阻断胞外钙离子通过L/T型钙通道流入胞内。尼莫地平的疗效已经在脊髓损伤的临床前研究和临床试验中测试过;然而,其有效性仍有待进一步论证。其中原因之一可能是治疗时间较短。本研究旨在评估长期给予尼莫地平在临床前脊髓损伤模型中的有效性及可能的作用机制。方法:本研究采用雌性大鼠,造成25 mm脊髓挫伤模型。本研究选择雌性大鼠是因为雌性大鼠的尿道比雄性大鼠更短、更宽,手动排空膀胱更容易。另外,脊髓挫伤模型被认为是贴近临床病理生理的脊髓损伤模型。脊髓损伤的大鼠随机分为尼莫地平治疗组和对照组。从损伤后1小时开始,尼莫地平治疗组和对照组分别皮下注射尼莫地平（10 mg/kg）或溶剂,每天1次,持续6周。本研究通过监测脊髓损伤大鼠的运动功能、后爪抓力、疼痛相关行为、膀胱功能、痉挛样症状以及旷场自发性活动来评估尼莫地平对脊髓损伤大鼠的疗效。组织学上,本研究通过检测脊髓损伤病灶体积、病灶周围神经元数量、腰段脊髓后角的胶质细胞增生和降钙素基因相关肽阳性纤维密度及腰段运动神经元钾-氯共转运体2进一步评估了尼莫地平可能的作用机制。结果:长期给予尼莫地平治疗改善大鼠的运动功能、疼痛相关行为和痉挛样症状,但在旷场自发性活动、后爪抓力和膀胱功能方面未见明显改善。与对照组相比,尼莫地平治疗组的大鼠病灶体积更小,组织残余和病灶周围神经元数量更多,其腰段脊髓后角的胶质细胞增生和降钙素基因相关肽阳性纤维密度均降低,并且腰段运动神经元钾-氯共转运体2细胞膜表达量更高。结论:本研究结果提示长期给予尼莫地平治疗可改善大鼠脊髓损伤后的功能恢复。尼莫地平作为一种可能对脊髓损伤有效的药物值得更进一步的研究。人胚胎干细胞分化的脊髓dI4区GABA能神经元治疗大鼠脊髓损伤后神经病理性疼痛的临床前研究目的:神经病理性疼痛是慢性脊髓损伤患者最严重的后遗症之一。这种严重的感觉障碍会发生于约70-80%的脊髓损伤患者中,并妨碍了这些患者的生活质量和康复效果。目前,神经病理性疼痛通常采用药物治疗。然而,药物治疗往往伴随不良的副作用,并且许多患者疼痛的缓解往往是不彻底的。此外,长期使用止痛剂可能引起药物耐受、镇静,甚至是成瘾。目前已有临床前研究采用胎儿前体细胞或人胚胎干细胞来源的内侧神经节隆起样前体细胞来治疗脊髓损伤后神经病理性疼痛。然而,由于这些细胞具有多潜能或胎儿来源的特性,可能不适合临床应用。因此,本文旨在评价人胚胎干细胞分化的脊髓d I4区GABA能神经元对大鼠脊髓损伤后神经病理性疼痛的作用。方法:本研究采用雌性大鼠,造成25 mm脊髓挫伤模型。由于在脊髓损伤后,雌性大鼠比雄性大鼠更容易手动排空膀胱,因此本研究仅使用雌性大鼠。脊髓损伤大鼠随机分为细胞移植组和培养基移植组,分别于脊髓损伤后7天移植人胚胎干细胞分化的脊髓GABA能神经前体细胞或培养基。采用BBB评分评价大鼠的运动功能。采用Von Frey测试和Hargreaves测试评估大鼠疼痛相关行为。此外,基于移植的细胞带有DREADD受体,本研究于移植后12周和24周分别评估了化学遗传学调控药物CNO（细胞激活）或SALB（细胞抑制）是否能调控移植组大鼠的行为。移植后24周处死大鼠,采用免疫荧光染色脊髓切片检测细胞存活、成熟、神经支配、纤维投射、潜在突触形成和化学遗传学有效性。结果:移植组大鼠的运动功能和疼痛相关行为得到一定程度改善。激活或沉默移植细胞对移植组大鼠的运动功能无明显影响。然而,基于CNO或SALB的移植物功能控制可分别缓解或增强疼痛相关行为。组织学上,移植的细胞在损伤脊髓内存活、表达成熟的神经元标记物、接受潜在的宿主支配、投射到腰段脊髓,并与宿主神经元之间形成潜在的突触联系。此外,通过c-Fos染色作为神经元活动的标志,本文的结果表明表达DREADD受体的细胞能被CNO激活。结论:本研究提示移植脊髓GABA能神经前体细胞是一种潜在有效的治疗脊髓损伤相关神经病理性疼痛的方法。未来可能需要将多种类型的细胞进行混合移植以取得更好的疗效。