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目的:证实肺炎支原体(Mycoplasma penumoniae,Mp)的荚膜多糖(capsularpolysaccharied,CPS)是树突状细胞(dendritic cell,DC)表面树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(dendritic cell-specific intercellular adhesionmolecule-3-grabbing nonintegrin,DC-SIGN)的病原相关分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns, PAMP),了解Mp CPS与DC-SIGN结合后对DC分泌细胞因子、吞噬功能及成熟的影响,为研究Mp的免疫逃避机制提供新的理论依据。方法:复苏和培养Mp M129菌株,离心收集菌体沉淀并抽提纯化CPS和脂质相关膜蛋白(lipid associated membrane proteins,LAMPs),用苯酚-硫酸法和BCA法分别测定CPS和LAMP的浓度。通过密度梯度离心法从健康人新鲜的外周血中分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并将其诱导成为DC,通过显微镜直接观察、吉姆萨染色观察及流式细胞术(flow cytometry, FCM)鉴定所培养的细胞是否为DC;通过间接免疫荧光分析(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测Mp CPS和DC-SIGN的相互结合;收集CPS和/或LAMPs处理的未成熟DC(immature dendritic cell,iDC)培养上清,用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测CPS和/或LAMPs作用于iDC后,白细胞介素10(interleukine10, IL-10)和白细胞介素12(interleukine12, IL-12)的表达水平。FCM检测CPS和/或LAMPs刺激前后iDC对FITC-dextran(多聚糖)的吞噬能力,了解其对DC吞噬功能的影响。同时用FCM检测CPS和/或LAMPs处理后DC表面HLA-DR抗原、DC特异标志CD83以及协同刺激分子CD80/B7-1、CD86/B7-2的表达,分析CPS和/或LAMPs对DC成熟的影响。结果:1.抽提的CPS的浓度为0.751mg/ml,LAMPs的浓度为0.217mg/ml。2.显微镜直接观察和吉姆萨染色观察发现贴壁的人PBMCs经完全培养基培养1~2d,尚未诱导成iDC,细胞呈散在状态。培养3~5d在细胞因子的刺激下分化成iDC,部分细胞呈克隆增殖团。在第6d用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后诱导成熟的mDC可出现典型的树突状态,细胞的体积略有增大;FCM检测发现经LPS刺激后,HLA-DR表达由(29.525±8.19)%升高为(77.47±19.11)%,B7类分子CD80由(48.50±0.59)%升高为(86.85±11.24)%,CD86由(32.71±12.70)%升高为(84.95±1.81)%。3.用IFA分析CPS与DC-SIGN的相互作用,发现用同源荧光抗体染色后荧光显微镜下可见CPS发绿色荧光,DC-SIGN发红色荧光,而细胞核用DAPI染色后发蓝色荧光。未处理组DC表面可检测到红色的荧光颗粒,用DC-SIGN的特异性中和抗体预处理后,DC细胞表面检测不到红色荧光,表明抗体可封闭DC-SIGN。CPS作用后的iDC和成熟DC(mature dendritic cell, mDC)表面可同时检测到绿色和红色荧光,两者融合后发黄色荧光,而且用DC-SIGN封闭抗体处理后,DC细胞表面检测不到绿色和红色荧光。4. CPS和/或LAMPs刺激iDC18h后ELISA检测细胞培养上清中IL-10和IL-12的表达水平,发现LAMPs单独处理组与对照组IL-10表达水平差异无显著性(P>0.05),CPS单独处理组及其与LAMPs共处理组和对照组细胞相比,培养上清中的IL-10水平差异有显著性(P<0.001);且CPS和LAMPs共处理组iDC分泌IL-10较两单独处理组显著增高(P<0.05),用2.8μg/ml CPS与7.2μg/ml LAMPs共处理时iDC分泌的IL-10的含量最高。而各处理组之间iDC分泌的IL-12无显著性差异(P>0.05)。5. CPS和/或LAMPs刺激iDC18h后FCM检测DC对FITC-dextran的吞噬作用,结果显示CPS单独刺激组较未处理组iDC吞噬的FITC-Dextran平均荧光强度显著增加(P<0.01)。CPS和LAMPs共刺激组较未处理组iDC吞噬的FITC-Dextran平均荧光强度差异无显著性(P>0.05)。6. FCM检测CPS和/或LAMPs刺激前后DC细胞表面膜分子CD80、CD86、CD83和HLA-DR的变化,发现CPS单独刺激组较未处理组DC细胞膜表面四种膜分子的表达显著下降(P<0.05),LAMPs单独刺激组DC较未处理组iDC的四种膜分子显著性增加(P<0.001);CPS和LAMPs共刺激组DC表面的CD80、CD86和HLA-DR膜分子均较未处理组DC和CPS处理组DC显著性增加(P<0.001),但与LAMPs单独处理组差异无显著性(P>0.05);而共刺激组CD83较未处理组和LAMPs处理组显著下降(P<0.001),与CPS处理组差异无显著性(P>0.05)。结论:1. DC-SIGN可识别并结合Mp CPS;2. Mp CPS可促进iDC分泌IL-10;3. Mp CPS可促进DC的吞噬功能和减少CD80、CD86、CD83和HLA-DR的表达抑制iDC的成熟,而LAMPs可刺激这四种膜分子的表达而促进DC的成熟。