产碱杆菌DN25降氰酶类型判断及其分离纯化

来源 :广西大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a619906915
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
氰化物在工业中的广泛应用造成大量含氰废水,环境污染问题严重。与传统化学处理法相比,生物降解具有无害化、可资源化的优点,是一种很有发展前景的污染治理方法。自然界中存在多种具有降氰能力的细菌、真菌和植物。本实验室筛选保藏的一株产碱杆菌Alcaligenes sp. DN25对无机氰具有较强降解活性,具有一定的工业应用前景。   本文通过分析菌株DN25催化氰降解的产物和氰降解反应进程,初步判定菌株的降解途径是由氰水解酶、氰水合酶和酰胺酶共同作用的水解途径,其中氰水解酶起主要作用。同时添加氰化物对菌株降氰酶的生物合成无诱导作用。   根据氰水解酶和氰水合酶的催化作用机理,在培养基中分别添加四种金属离子和四种含硫物质来考察其对培养物比活力的影响。Co2+对菌体生长有抑制作用,而Zn2+、Mn2+、MoO42-对菌体生长有促进作用:Co2+、MoO42-的加入使菌体降氰活性显著降低。DL-半胱氨酸对菌体产酶有明显促进作用,DL-甲硫氨酸可同时提高菌株的产酶水平和细胞生长量。在1L三角瓶中进行放大培养优化,得到最佳培养条件:在基本培养基中添加0.8%(W/V)的DL-甲硫氨酸,装液量l00mL,pH9.0,接种量8%。培养物比活力平均值为2.18U·mL-1,是优化前的3.46倍。菌株DN25的生长曲线和产酶曲线趋势基本一致,培养40h后生长进入稳定期。   选用超声波破碎法破碎细胞并提取粗酶,最适破碎条件为:超声功率400W,每次工作时间4s,间歇时间7s,净工作时间9min。采用硫酸铵盐析法对粗酶进行初步分离,硫酸铵分级盐析饱和度范围为30%-50%。本文以离子交换层析和疏水层析为顺序组合的纯化方案对降氰酶进行了初步纯化。部分纯化的酶比活力达到23.8 U·mg-1,是粗酶比活力的21.8倍。酶活总回收率达到29.5%。
其他文献
在总氮的测定过程中,空白值经常存在偏高的情况,加大了系统误差.因此,从试剂器皿影响、操作过程中的影响及环境影响等方面进行全面论述分析,结果表明影响空白实验值的因素有
人角膜主要由内皮、基质和上皮及其衍生物等组成,角膜内皮细胞(HCEC)在成年后不具有再生能力,外科创伤或者疾病的治疗如青光眼的治疗、糖尿病等都会导致内皮细胞数量的减少,导致视力减弱。抗菌滴眼液在临床上的使用非常广泛,主要用来治疗角膜炎、结膜炎、沙眼等眼部疾病。本文研究对象左氧氟沙星和利福平是常用的两种抗菌滴眼液,临床浓度分别为4.88g/L和0.5g/L。左氧氟沙星滴眼液主要用于治疗细菌性结膜炎和
在矿物资源加工分选工艺中,泡沫浮选是应用范围最广工艺之一。本文系统地总结了不同类型的浮选机和浮选柱,并对二者进行了比较,认为浮选柱能够有效提高矿物加工分选效率和资