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保元汤是中医学经典方剂之一,组方严谨精炼,用药效专力宏。近年来,为了迅速适应国家药品的市场需求和促进中草药复方制剂的快速发展,国家大力鼓励经典名方的开发,对出自古代经典名方中的中药复方制剂采用简化审核。本研究以中医药基础理论为指导,应用现代技术对保元汤标准汤剂的制备工艺、质量标准展开了深入研究,以保证制剂的工艺合理、质量可控。为经典名方研发模型的建立和质量控制提供了新思路和新方法,并为经典名方的现代化复方制剂研究提供了实验依据。保元汤最早记载于明代魏直的《博爱心鉴》第一册上卷,主要用于治疗小儿痘疮基础方,魏直所创保元汤汤由人参一钱、黄芪三钱、甘草一钱组成。《古代经典名方目录（第一批）》所收载保元汤为明孙志宏《简明医彀》中记载的保元汤,由人参一钱、黄芪二钱、甘草五分、肉桂二分组成,加生姜一片,水煎服。本实验依据《简明医彀》中对于保元汤相关记载进行文献考证、制备工艺、质量标准等研究,为经典名方保元汤的开发研究提供方法。研究目的以经典名方保元汤为研究对象,参考《简明医彀》原文记载的古代制备工艺制备15批保元汤标准汤剂和对应实物冻干粉,利用指标成分含量测定、特征图谱、出膏率以及UPLC/Q-TOF-MS等方法建立15批保元汤标准汤剂和对应实物质量标准,为经典名方的开发研究提供参考。研究方法1.利用DNA条形码技术鉴别保元汤中多基原药材黄芪、甘草基原,保证本研究中所使用这两味药材基原一致;在2015版《中国药典》的指导下完成各味药材的炮制研究。2.依据《简明医彀》“煎丸服法”中记载,“每剂水二锺,煎八分。渣用水锺半,煎七分”。通过折算现代剂量、考察煎药器具、加水量和煎药时间等因素,完成对保元汤的制备工艺研究。3.以保元汤标准汤剂为模型,建立UPLC含量测定方法,完成方法学考察、特征图谱建立、转移率、出膏率测定、UPLC/Q-TOF-MS定性分析等研究。4.以保元汤对应实物冻干粉为模型,完成冻干粉的含量测定、转移率等研究。研究结果主要研究结果如下:1.配伍药材及饮片研究根据2015版《中国药典》及相关文献考证,确定了保元汤所使用饮片的基原:人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎,黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membrsanaceu.var.mongholicus的干燥根,甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根茎,肉桂为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮,生姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎。利用DNA条形码技术鉴定药材基原,筛选使得本实验所用黄芪均为蒙古黄芪,甘草均为乌拉尔甘草。参照2015版《中国药典》中炮制要求进行实验室炮制工艺探索,确定炮制方法为:人参手工挑选后每20 s一批进行淘洗,常温润制17 h后切为2 mm薄片,50℃鼓风干燥6 h将其烘干;黄芪将其大小分开后每45 s一次进行淘洗,常温闷润12 h后切为4 mm厚片,50℃鼓风干燥7h将其烘干;甘草将其大小分开后每30 s一次进行淘洗,50℃热润12 h后切为4 mm厚片,50℃鼓风干燥7 h将其烘干;肉桂净选之后用铜舂捣成碎片;生姜净选之后反复淘洗至无泥沙后将其切为4 mm厚片。2.保元汤的制备工艺研究依据相关文献考证及专家共识,保元汤方中所涉及古代单位可换算为:1钱为3.73 g,生姜一片为3 g。综上,经典名方保元汤的处方量为:人参3.73 g,黄芪7.46 g,甘草1.86 g,肉桂0.75 g,生姜一片,约3 g。通过对煎药壶中剩余药液量的摸索与验证,确定了符合《简明医彀》原文记载的制备工艺:称取人参3.73 g,黄芪7.46 g,甘草1.86 g,肉桂0.75 g,生姜3 g,浸泡35 min后置于陶瓷材质的煎药壶中,加水600 ml,使用加热板500 W加热煮沸15 min后,将加热功率调低至300 W继续煎煮80 min左右,煎煮完成后药液过8号筛,得药液240 ml;药渣加水450 ml,以500 W功率加热沸腾10 min,调低至300 W继续煎煮50 min左右,得药液210 ml,合并两次药液,即得450 ml保元汤标准汤剂。3.保元汤的质量标准研究将各味饮片随机组合,制备15批保元汤标准汤剂和对应实物（冻干粉）。采用ACQUITY BEH Shied C18 column（2.1 × 100 mm,1.7 μm）色谱柱,以 0.01%甲酸水（A）-0.05%甲酸乙腈（B）为流动相梯度洗脱建立了专属性特征图谱,柱温30℃,流速0.4 ml/min,检测波长203 nm、237nm。研究结果表明,不同批次间的特征图谱具有较高的相似性,其中共有峰21个。15批保元汤标准汤剂特征图谱与对照特征图谱相似度均良好,相似度＞0.90。利用UPLC/Q-TOF-MS进行共有峰指认工作,共指认17个共有峰,分别为liquiritigenin 4’,7-diglucoside（甘草苷元-4’,7-二葡萄糖苷）、epicatechin（表儿茶酸）、calycosin-7-O-β-D-glucoside（毛蕊异黄酮葡萄糖苷）、liquiritin apioside（芹糖甘草苷）、liquiritin（甘草苷）、8-methoxy-5-O-glucoside flavone、ginsenoside Rg1（人参阜苷 Rg1）、ginsenoside Re（人参阜苷 Re）、isoliquiritin apioside（芹糖异甘草苷）、isoliquiritin（异甘草苷）、liquiritigenin（甘草素）、biochanin A（鹰嘴豆芽素 A）、ginsenoside Rb1（人参阜苷 Rb1）、isoformononetin（异刺芒柄花素）、gypenoside ⅩⅦ（七叶胆苷ⅩⅦ）、6-gingerol（6-姜辣素）、glycyrrhizic acid（甘草酸）,非共有峰共指认14个,分别为24-hydroxy-licorice-saponin A3（24-羟基-甘草皂苷 A3）、uralsaponin C（乌拉尔甘草皂苷 C）、ginsenoside Rf（人参皂苷 Rf）、licorice-saponin A3（甘草皂苷 A3）、uralsaponin F（乌拉尔甘草皂苷 F）、ginsenoside Rb2（人参皂苷 Rb2）、astragaloside Ⅳ/Ⅲ（黄芪皂苷 Ⅳ/Ⅲ）、ginsenoside Rc（人参皂苷 Rc）、licorice-saponin E2（甘草皂苷 E2）、ginsenoside Ro（人参皂苷 Ro）、licorice-saponin G2（甘草皂苷 G2）、licorice-saponin H2（甘草皂苷H2）、isoastragaloside Ⅰ（异黄芪皂苷Ⅰ）、glycycoumarin（甘草香豆素）。其中皂苷类化合物18个,黄酮类化合物11个,1个酚类化合物,1个香豆素类化合物。含量测定方法学考察显示方法的精密度、重复性、稳定性均符合要求,指标成分人参皂苷Rb1、甘草酸的平均回收率分别为103.00%（RSD值为1.51%）、99.96%（RSD值为0.58%）。特征图谱方法的精密度结果＞0.97,表明该方法精密度良好;稳定性结果＞0.97,表明供试品溶液在24 h内稳定;重复性结果＞0.9,表明该方法的重复性良好,均符合要求。出膏率的范围为28.36%～33.69%,平均出膏率为31.62%。保元汤中指标成分人参皂苷Rb1从饮片到标准汤剂的转移率为51.04%～70.06%,平均转移率为60.01%;标准汤剂到对应实物的转移率范围为78.14%～101.19%,平均值为90.44%;饮片到对应实物的转移率范围为40.99%～62.76%,平均值为54.26%。甘草酸从饮片到标准汤剂的转移率为54.89%～74.38%,平均转移率为63.94%;标准汤剂到对应实物的转移率为89.99%～99.88%,平均值为94.19%;饮片到对应实物的转移率范围为49.40%～71.95%,平均值为60.29%。以上测定结果均未出现离散数据（均值的70%～130%）。结论本课题以经典名方保元汤为例,在对古籍中记载保元汤进行出处、基原、剂量、工艺等考察后,以中医药基础理论为指导,首次建立了经典名方保元汤的特征图谱,并还原了其古代制备工艺;确定标准汤剂、对应实物中指标成分人参皂苷Rb1、甘草酸的转移率范围,利用UPLC/Q-TOF-MS对色谱峰进行指认,对保元汤的物质组成进行鉴别。通过上述研究,为经典名方保元汤的整体质量控制提供了方法,也为经典名方的开发工作提供了依据。