猪细小病毒SD-68株全基因序列测定及其VP2基因与猪圆环病毒ORF2基因在昆虫细胞中的共表达

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本文对猪细小病毒(PPV)SD-68株NS1基因进行了克隆和序列测定,结果表明SD-68株NS1基因全长1989bp,编码662个氨基酸组成的多肽。该序列与猪细小病毒SY-99株、Kresse株、NADL-2(5075)和NADL-2(4973)株的NS1基因比较,核苷酸的同源性分别为99.9%、99.9%、99.7%、98.1%,氨基酸的同源性分别为99.7%、99.5%、99.5%、96.7%。猪细小病毒SD-68株与MVM(i)、MEV(Abashiri)、CPV、FPV、BPV3、GPV NS1的进化树分析表明:猪细小病毒SD-68株NS1与MVM(i)NS1亲缘关系最近,与BPV3 NS1的亲缘关系最远;在Thr435和Ser473位点猪细小病毒SD-68株与MVM(i)完全一致,表明Thr435和Ser473是猪细小病毒SD-68株NS1潜在的磷酸化位点。 对猪细小病毒(PPV)SD-68株VP2基因进行的克隆和序列测定表明:SD-68株VP2基因全长1740bp,编码579个氨基酸残基组成的多肽;猪细小病毒SD-68株与Kresse株、SY-99株、NADL-2(5075)株、NADL-2(4973)株、US-1株的VP2基因比较,核苷酸的同源性在99%以上,氨基酸的同源性在96%以上。进化树分析表明SD-68株与kresse株的亲缘关系最近;在决定毒株组织嗜性的关键氨基酸位点上(378,383及436),SD-68株与kresse株的差异最小,据此推测SD-68株的组织嗜性与Kresse株相似,即SD-68株属皮炎型猪细小病毒;而比较弱毒株NADL-2、SD-68和强毒株kresse VP2的氨基酸差异后发现,215、378和383可能是决定猪细小病毒致病性强弱的关键位点。 本文对猪细小病毒SD-68株全基因组结构基因与非结构基因进行了序列及进化分析:参照Genbank收录的猪细小病毒(PPV)Kresse株、NADL-2(5075)株和NADL-2(4973)株的全基因组序列,设计了4对引物,对用PCR法扩增出的猪细小病毒SD-68株的4条基因片断分别进行克隆和测序,其拼接结果为包含SD-68株全部结构基因和非结构基因长4377bp的核苷酸序列。将该序列的VP1、VP2、NS1、NS2基因分别与Kresse株、NADL-2(5075)株和NADL-2(4973)株相应的基因进行同原性比较表明,核苷酸同原性分别为99.4%、99.4%、98.4%;99.3%、99.2%、99.0%;99.9%、99.7%、98.1%;99.8%、99.4%、93.8%。SD-68株的此段核苷酸序列与猪
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