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目的:1)对人骨髓瘤细胞株(MM1.S与RPMI-8226细胞)转染miR-375模拟物,观察细胞增殖、凋亡变化,阐明miR-375在骨髓瘤细胞中的抑癌作用;2)检测人骨髓瘤细胞株转染miR-375后的3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK1)与胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor 1,IGF-1R)的m RNA与蛋白表达,探讨miR-375对骨髓瘤细胞抑癌作用的分子机制;方法:1.利用脂质体转染技术,将miR-375模拟物转染入MM1.S及RPMI-8226细胞,荧光显微镜下观测转染效果,实时荧光定量PCR技术检测miR-375表达水平以检测转染效率。2.采用CCK-8方法,检测转染miR-375模拟物对MM1.S细胞及RPMI-8226细胞增殖的影响。3.采用Annexin V/PI染色法,检测转染miR-375模拟物对MM1.S细胞及RPMI-8226细胞凋亡的影响。4.采用PI染色法,流式细胞仪中检测转染miR-375模拟物对MM1.S细胞及RPMI-8226细胞周期的影响。5.采用实时荧光定量PCR方法,检测转染miR-375模拟物对MM1.S细胞及RPMI-8226细胞中PDK1 m RNA与IGF-1R m RNA的影响。6.采用Western blot法,检测转染miR-375模拟物对MM1.S及RPMI-8226细胞的PDK1与IGF-1R蛋白表达的影响。结果:1.MiR-375模拟物分别转染MM1.S与RPMI-8226细胞后,miR-375表达分别增加42.85与51.30倍,提示转染效果理想。2.与阴性对照组及空白组相比,miR-375模拟物转染组的骨髓瘤细胞(如MM1.S及RPMI-8226)的增殖活性明显降低。3.相比阴性对照组及空白组,miR-375模拟物转染组的骨髓瘤细胞(如MM1.S及RPMI-8226)的凋亡诱导活性明显增加。4.与阴性对照组及空白组相比,miR-375模拟物转染组的骨髓瘤细胞(如MM1.S及RPMI-8226)阻滞于G1期百分比明显增加。5.与阴性对照组及空白组相比,miR-375模拟物转染组的骨髓瘤细胞(如MM1.S及RPMI-8226)的PDK1 m RNA和蛋白的表达均减少。6.与阴性对照组及空白组相比,miR-375模拟物转染组的骨髓瘤细胞(如MM1.S及RPMI-8226)的IGF-1R m RNA和蛋白的表达均减少。结论:1.在骨髓瘤细胞中,miR-375通过抗细胞增殖、诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期于G1期,发挥抑癌基因作用。2.MiR-375通过下调PDK1及IGF-1R表达发挥抗骨髓瘤作用。