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[目的]原发性高血压是最常见的危害人体健康的心血管疾病,是在遗传易感的基础上,多种环境因素综合作用的结果。高血压病的病因病理机制复杂,其中钠肽家族及其受体起着举足轻重的作用。前人及我们前期的研究均发现高血压患者存在NPR-C基因A-55C位点多态性,并影响高血压病的发生,但其在病理机制中的作用并不清楚。NPR-C基因A-55C位点处于基因表达调控区,推测该位点多态性有可能影响NPR-C表达,进而影响其对配体ANP的清除,或影响NPR-C及其配体结合后的信号通路。为此,本研究试图通过对高血压病患者NPR-C基因A-55C位点多态性与外周血调节血压相关因素的分析,对上述假设给予求证。[研究方法]1.研究对象及样本采集根据高血压的诊断标准:参照《2010年高血压防治指南》,排除继发性高血压者。剔除研究对象的民族界定不清或基本特征指标信息不清者。从昆明市第一人民医院体检、门诊和住院患者中,筛选出100例云南汉族原发性高血压患者作为研究对象(父系、母系三代均为汉族,均居住云南境内),年龄在40-80之间,其中男48例,女52例。采集患者空腹静脉血进行患者NPR-C基因A-55C位点多态性、血脂血糖等基本指标和NPR-C相关观察指标的检测,并问卷调查采集患者的血压、体重、升高等其他基本特征指标。2.昆明市第一人民医院生化室全自动生化分析仪及其检测系统对TC、TG、LDL、HD、LFPG、HCY等研究对象的基本指标进行检测。3.PCR-RFLP法检测研究对象NPR-C基因A-55C位点多态性(1)PCR扩增NPR-C基因A-55C位点所在区域目的DAN片段通过煮沸裂解法对研究对象外周血DNA进行提取;引用文献报道的引物序列合成引物,进行PCR扩增条件和扩增体系的优化;用优化所得的最佳扩增体系和扩增条件后,对100例研究对象样本进行NPR-C基因A-55C位点所在区域目的DNA片段进行PCR扩增;并抽样通过扩增产物测序验证PCR扩增产物的特异性。(2)PCR扩增产物RFLP多态性检测引用文献提供方法,用限制性内切酶Hgal,对PCR扩增到的目的DNA片段进行酶切体系优化;用优化得到的最佳酶切体系对100例研究对象样本PCR扩增产物进行Hgal酶切;电泳分析酶切片段的数量与大小,并判读患者NPR-C基因A-55C位点多态性。4.采用针对人血清中ANP、NO、VEGF、ET-1和cAMP检测的进口商品试剂,对87例研究对象观察指标:血清中ANP、NO、VEGF、ET-1、cAMP水平进行检测。5.采用SPSS Statistics 16.0统计学软件包对数据进行统计学处理与分析。计量资料呈正态分布,采用均数±标准差表示;计量资料呈偏态分布的,用四分位间距表示。基因型与等位基因的分布频率用计数统计;研究对象不同基因型之间临床基本资料比较采用两独立样本t检验,其中,计量资料呈偏态分布的用秩和检验;血压与患者外周血观察指标水平的关系分析、不同基因型携带者的血压与外周血观察指标水平的关系分析,采用多重线性回归分析;高血压合并冠心病者/合并糖尿病者分别与基因型和观察指标的关系均采用Logistic回归进行统计分析。统计学判定P<0.05为差异有统计学意义[结果]1.100例研究对象的基本特征100例研究对象基本特征平均水平如下:年龄:62.64±9.01岁、BMI:25.41±3.49 kg/m2、SBP:175.62±22.44 mmHg、DBP:103.18±19.03 mmHg、FPG:5.50±1.70mmol/L、TC:4.50±1.08 mmol/L、TG:1.32(0.91,1.70)mmol/L、LDL:2.64±0.85 mmol/L、HDL:1.21±0.26 mmol/L、HCY:11.05(9.55,14.76)mmol/L。TC、LDL、HDL水平女性高于男性(P<0.05);HCY水平男性高于女性(P<0.05)2.100例研究对象NPR-C基因A-55C位点基因型和等位基因频率分布用PCR-RFLP方法对100例云南汉族原发性高血压患者进行NPR-C基因A-55C位点多态性检测,未发现AA基因型;AC基因型25例,频率为0.25;CC基因型75例,频率为0.75。A等位基因频率为0.125;C等位基因频率为0.875。3.研究对象外周血ANP、NO、ET-1、VEGF、cAMP水平检测结果外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平检测结果显示,87例研究对象5项观察指标的四分位间距分布分别是:ANP浓度水平为1.60(0.66,2.30)ng/mL、NO 浓度水平为 9.95(4.54,21.41)umol/L、ET-1 浓度水平为 7.33(1.77,8.78)pg/mL、VEGF 浓度水平为 239.45(164.59,324.61)pg/mL、cAMP 浓度水平为 32.66(18.52,68.94)pmol/mL。4.不同基因型患者基本特征指标的比较AC基因型25例患者与CC基因型75例患者BMI、FPG、TC、LDL、HDL、HCY水平进行比较,结果显示各项基本特征指标水平在两者间差别无统计学意义(P>0.05)。5.研究对象中不同基因型携带者ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平的比较AC基因型22例患者与CC基因型65例患者外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平进行比较,结果显示CC基因型携带者NO中位数水平高于AC基因型携带者;VEGF中位数水平低于AC基因型携带者,但经秩和检验处理,两组间差别未显示出统计学意义(P>0.05)。6.87例研究对象血压与外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平的相关性分析分别以收缩压和舒张压为应变量,以外周血中ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF浓度为自变量,进行多因素线性回归分析,结果显示患者外周血ANP、NO、ET-1与收缩压未见相关性(P>0.05);cAMP水平与收缩压呈负相关性(P<0.05),VEGF 水平与收缩压呈正相关性(P<0.05)。ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平与舒张压未见相关性(P>0.05)。7.不同基因型携带者的血压与外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平的相关性分析(1)收缩压与外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平的相关性分析分别以AC基因型和CC基因型患者的收缩压为应变量,以外周血中ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF浓度为自变量,对22例AC基因型和65例CC基因型患者进行多因素线性回归分析。结果显示:AC基因型患者外周血ANP、VEGF与AC基因型携带者的收缩压未见相关性(P>0.05);cAMP、ET-1水平与收缩压呈负相关性(P<0.05),NO水平与收缩压呈正相关性(P<0.05)。CC基因型患者外周血ANP、NO、ET-1水平与收缩压未见相关性(P>0.05);cAMP水平与收缩压呈负相关性(P<0.05),VEGF水平与收缩压呈正相关性(P<0.05)。(2)舒张压与外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平的相关性分析分别以AC基因型和CC基因型患者的舒张压为应变量,以外周血中ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF浓度为自变量,对22例AC基因型和65例CC基因型患者进行多因素线性回归分析。结果显示:AC基因型患者外周血ANP、ET-1、cAMP、VEGF与AC基因型携带者的舒张压未见相关性(P>0.05);NO水平与舒张压呈正相关性(P<0.05)。CC基因型患者外周血5个观察指标与CC基因型携带者的舒张压未见相关性(P>0.05)。8.原发性高血压合并症影响因素的分析(1)原发性高血压合并症冠心病影响因素的分析以原发性高血压合并冠心病为应变量取值1,未合并冠心病取值0,以NPR-C基因 A-55C 位点基因型和外周血 ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF、SBP、TG、LDL为自变量,进行logistic多因素回归分析。结果显示TG、LDL、ANP、NO、CC基因型与合并症冠心病相关(P<0.05)。(2)原发性高血压合并症糖尿病影响因素分析以原发性高血压合并糖尿病为应变量取值1,未合并糖尿病取值0,以NPR-C基因A-55C位点基因型和外周血ANP、NO、ET-1、cAMP、VEGF水平为自变量,进行logistic多因素回归分析。结果中未显示出有统计学意义的影响因素(P>0.05)。[结论]1.云南汉族原发性高血压患者中NPR-C基因A-55C位点基因多态性分布以CC基因型为主,未见AA基因型。CC基因型与高血压病易感相关。2.云南汉族原发性高血压患者中,NPR-C基因A-55C位点基因多态性可能影响外周血NO和VEGF水平。3.云南汉族原发性高血压患者中,NPR-C基因A-55C基因多态性可能影响了 ANP或CNP/NPR-C信号通路中cAMP水平及效应分子NO、ET-1、VEGF 水平,进而影响ANP或CNP/NPR-C信号通路的血压调节作用,但可能并不影响NPR-C 清除 ANP。4.云南汉族原发性患者中,NPR-C基因A-55C基因多态性可能影响原发性高血压患者合并症冠心病,同时,ANP、NO可能增加患者合并冠心病的危险性。