福尔马林实验被广泛用于痛机制的研究及镇痛药的筛选。皮下注射福尔马林引起的伤害性神经冲动经初级传入Aδ和/或C纤维传入脊髓背角，引起谷氨酸、P物质等兴奋性递质的释放，这些递质与其受体结合后，参与伤害性信息的传递。MAPKs是丝氨酸激酶，在细胞膜到核内的信号转导中起关键的作用。p38 MAPK是MAPK家族中的一组酶，通过一系列物理或化学刺激被激活，即被磷酸化。大量的研究表明，p38 MAPK通过对细胞转录、蛋白合成、受体表达等的调节，在神经元可塑性变化及痛信号转导中起重要作用。本研究室及其他研究者的观察都证实外周和脊髓NMDA受体在福尔马林引起的痛模型中发挥重要的作用。NMDA受体拮抗剂MK-801能显著降低福尔马林实验的痛行为。但在福尔马林痛实验中激动的NMDA受体是否也通过活化脊髓p38 MAPK发挥作用，未见相关报道。因此，本实验在外周注射福尔马林的基础上，通过行为学观察和功能形态学的方法，结合鞘内或外周给予NMDA受体拮抗剂MK-80l，试图证实NMDA受体对大鼠脊髓p38 MAPK活化的影响。 实验在Wistar雄性大鼠(100～120g)进行。本实验分为两部分， 第一部分是通过中枢给予MK-801观察中枢NMDA受体对大鼠脊髓p38 MAPK活化的影响。实验动物分为两组。第一组是福尔马林+生理盐水组(n=6)，第二组是福尔马林+MK-801组.根据MK-801(Sigma)的注射剂量，将福尔马林+MK-801组进一步分为10nmol、50nmol和100nmol(n=6)三个亚组。各组大鼠均于左后脚掌面皮下注射5％福尔马林50ul后立即进行行为学观察，以大鼠舔咬注射侧脚掌作为痛反应的观察指标。预实验显示，formalin脚掌注射对p38表达量没有影响，但却增加了p38的磷酸化，formalin注射后5分钟开始出现，20分钟达高峰，之后逐渐下降，45分钟恢复正常。在随后的实验中，我们以20分钟的P-p38作为过程对照，观察鞘内给予NMDA受体拮抗剂MK-801之后P-p38的活化情况。在formalin注射前15分钟鞘内给予NS作为对照或MK-801(10、50、100nmol)，之后在formalin注射后20分钟，取出动物腰膨大部位进行Western blot检测。 第二部分是通过外周注入MK-801观察外周NMDA受体在福尔马林引起的脊髓p38活化中的作用。实验动物分为两组。第一组是福尔马林+生理盐水组(n=6)，第二组是福尔马林+MK-801组.根据MK-801(Sigma)的注射剂量，将福尔马林+MK-801组进一步分为50nmol、100nmol和150nmol(n=6)三个亚组。各组大鼠均于左后脚掌面皮下注射5％福尔马林50ul后立即进行行为学观察，以大鼠舔咬注射侧脚掌作为痛反应的观察指标。在随后的实验中，在formalin注射后20分钟，取出动物腰膨大部位进行Western blot检测。 结果显示，在第一部分实验中，MK-801组与对照组相比，MK-801组仅在大剂量(50、100nmol)时对第一时相舔咬注射侧脚掌有抑制作用；而对第二时相舔咬注射侧脚掌，各个剂量的MK-801均有显著的抑制作用。数据显示，对照组的第二时相舔咬时间为127.00±17.78s，而在MK-801组分别为65.8±13.37s、60.8±16.90s和39.6±4.16s与对照组相比均有显著性(均为P<0.05)。在随后的Western blot检测中发现，鞘内给予MK-801之后，可以抑制formalin注射后诱导的P-p38的活化增加，并呈现剂量依赖性。数据显示，P-p38在对照组中为100.00±0.00，而在MK-801组分别为70.49±7.37、40.89±6.6和19.35±4.48，与对照组相比均有显著性差异(均为P<0.05)。 在第二部分的实验中，脚掌注入MK-801在较大的剂量(100、150nmol)时对第一时相舔咬注射侧脚掌有抑制作用。数据显示，对照组第一时相舔咬时间为97.4±7.14s，而在MK-801组仅在大剂量(100、150nmol)有抑制作用。对照组第二时相舔咬时间为258±16.54s，而在MK-801组分别为230.2±36.67s、139.8±7.85s和90±19.97s与对照组相比均有显著性(均为P<0.05)。Western blot检测显示，MK-801在较大的剂量(100、150nmol)时对活化的P-p38有抑制作用。 综上所述，本实验的主要结果如下： 1.大鼠脚掌注射福尔马林可以同时引起大鼠的痛行为反应和脊髓背角P-p38的活化。 2.脚掌注射福尔马林引起的痛行为反应包括两个时相。脊髓和外周NMDA受体拮抗剂MK-801.可以明显减弱注射福尔马林引起的痛行为反应，尤其是第二时相的痛行为反应。 3.脚掌注射福尔马林对p38表达量没有影响，但却增加了p38的磷酸化，formalin注射后5分钟开始出现，20分钟达高峰，之后逐渐下降，45分钟恢复正常。 4.鞘内给予MK-801之后，可以抑制formalin注射后诱导的P-p38的活化增加，并呈现剂量依赖性；外周给予MK-801之后，在较大的剂量(50、100nmol)时对活化的P-p38有抑制作用。 结论：脊髓和外周NMDA受体的活动是引起脚掌注射福尔马林脊髓背角p38 MAPK活化的原因之一。