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目的:肺癌在全球范围具有高发病率和死亡率,是对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。目前肺癌的发病机制尚未明确,缺乏早期诊断和较好的治疗方法,在肺癌中发现新的重要基因十分必要。雌激素相关受体α(ERRα)是一类无需结合配体便可以发挥功能的核受体。近年来发现ERRα与多种癌症相关。有研究报道其能通过促进肿瘤细胞的增殖、迁移及侵袭等过程发挥癌基因作用,在肺癌中也有少量相应报道,但ERRα在肺腺癌中的表达调控、功能及与预后的相关性不明,本研究旨在探讨ERRα在肺腺癌发生发展中的作用,为肺癌的早期诊断,靶向治疗和预后评估提供新的视角。方法:1.利用荧光定量PCR技术(qPCR)检测ERRα在肺腺癌细胞(A549、NCI-H1395、NCI-H1975)、肺鳞癌细胞(SW900、NCI-H520)以及正常肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)中的mRNA表达水平;利用蛋白免疫印迹方法(Western blot)检测ERRα在肺腺癌细胞(A549、NCI-H1395、NCI-H1975)、以及正常肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)中蛋白表达水平;通过免疫组织化学方法对88例配对肺腺癌临床组织和癌旁组织(及4例单独的肺腺癌组织)进行ERRα蛋白水平的检测。2.利用Illumina 850k甲基化芯片对正常肺支气管上皮细胞(BEAS-2B)、肺腺癌细胞(A549)和肺鳞癌细胞(SW900,NCI-H520)进行差异甲基化位点的筛查,将筛出的甲基化差异位点进行甲基化特异性PCR技术(MSP)验证其甲基化水平。3.采用Kaplan Meier plotter分析公共数据库(TCGA、EGA)中ERRα的mRNA表达水平与肺癌临床资料中存活时间的相关性。用IRS评分标准对经免疫组化检测的肺腺癌组织中ERRα蛋白表达水平进行评分,并结合患者临床信息进行预后分析。4.构建肺腺癌原位癌小鼠模型,利用免疫组织化学方法、Western blot和酶联免疫吸附试验方法(ELISA)分别定性和定量检测关键基因ERRα在肺腺癌小鼠肿瘤组织中的表达水平。5.构建ERRα敲低肺腺癌细胞株(A549、NCI-H1395、NCI-H1975),并进一步采用CCK-8实验、划痕实验、tranwell实验、细胞周期实验分析ERRα对细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞周期的影响。对构建ERRα敲低肺腺癌细胞株进行线粒体DNA拷贝数和ATP的检测。结果:1.qPCR和Western blot结果表明ERRα在肺腺癌细胞株(A549、H1395、H1975)中高表达(P<0.01),免疫组化结果显示ERRα在肺腺癌组织里高表达。Illumina 850kDNA甲基化芯片筛出差异甲基化位点2413个,对应基因1675个,筛出ERRα甲基化位点29个,其中肺腺癌细胞中ERRα关键甲基化位点存在低甲基化变化(以正常肺上皮细胞为对照),MSP验证结果表明关键位点呈低甲基化(P<0.001)。2.Kaplan Meier plotter分析公共数据库结果表明,ERRα与肺腺癌预后不良相关(P<0.001,HR=1.68),而与肺鳞癌预后无关(P=0.78)。对88组配对肺腺癌组织(另有4例单独癌组织)免疫组化打分并结合临床资料分析显示,肺腺癌中ERRa的高表达与低存活率呈正相关(P<0.001,HR=1.597)3.成功构建的肺腺癌原位癌BALB/c小鼠模型,免疫组织化学方法、供stemblot和酶联免疫吸附试验方法(ELI SA)定性和定量检测结果显示ERRa在肺腺癌小鼠肿瘤组织中高表达(P<0.0 1)。4.成功构建ERRct敲低肺腺癌细胞株(s hERRa-A549、H1 3 9 5、H19 7 5);C CK-8实验、划痕实验、tr an wel l实验、细胞周期实验等功能实验表明,ERRa的敲低抑制了肺腺癌细胞的增殖、侵袭、迀移能力并使细胞阻滞于G2/M期(P<0.01)。此外,我们还发现ERRa敲低的三株肺腺癌细胞株中线粒体的DNA拷贝数和ATP含量均下降(p<0.05)。结论:1.ERRa在肺腺癌的细胞株(A549、H1395、H1975)、肺腺癌BALB/c小鼠模型、临床组织水平均呈现高表达。ERRa的表达上调可能与肺腺癌细胞中甲基化位点低甲基化有关。2.ERRa可能通过促进肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及影响细胞周期参与肺腺癌的发生发展,同时发现其能导致线粒体DNA拷贝数和ATP含量,合瘤细胞的变化提示其可能通过影响线粒体的生功能物成和促进肿的增殖、迀移及侵袭等过程。3.ERRa可标能为腺不良预后的作肺癌评估指标。