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研究目的利用肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae, C.pn)体外感染大鼠原代血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell, VSMC)模型；观察C.pn感染对VSMC迁移能力的影响,研究磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase, PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Serine/threonine kinase, Akt)和Toll受体2(Toll like receptor2, TLR2)-PI3K/Akt信号转导通路在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用,探讨其相关分子机制。内容和方法1. C.pn增殖培养后体外感染大鼠原代VSMC;2. C.pn感染VSMC后,利用透射电镜(Ttransmission electron microscope, TEM)确定感染模型成功建立；3. Wound-healing实验和Trans well实验从二维和三维水平分别观察C.pn感染VSMC后其迁移能力的变化：4.逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)实验检测C.pn感染后各组VSMC PI3K mRNA表达水平；5. Western blot实验检测C.pn感染VSMC后不同时间点Akt的磷酸化水平；6.用P13K特异性抑制剂LY294002抑制P13K的活性,Western blot实验检测各组VSMC磷酸化Akt的表达变化,Wound-healing实验和Transwell实验观察各组VSMC迁移能力的改变；7.用TLR2中和抗体抑制TLR2的活性,Western blot实验检测C.pn感染后各组VSMC Akt的磷酸化水平,确定TLR2在介导C.pn感染诱导PI3K/Akt磷酸化中的作用。结果1.C.pn感染VSMC后,透射电镜下可见胞浆内出现典型C.pn原体(Elementary body, EB),提示C.pn感染VSMC模型成功建立；2. Wound-healing实验结果显示,C.pn感染VSMC后,细胞向划痕中央迁移的面积明显大于正常对照组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,C.pn感染组的细胞穿膜数明显多于正常对照组(P<0.05)；3.PI3K特异性抑制剂LY294002预处理VSMC后,RT-PCR实验结果显示,C.pn感染组PI3K mRNA的条带亮度与正常对照组相比较无明显区别；使用LY294002预处理的C.pn感染组VSMC PI3K mRNA的条带与单纯C.pn感染组对比,亮度也无明显改变,差异均无统计学意义；4.分别于C.pn感染VSMC O h、15min、30min、1h、2h、3h、6h、12h和24h后提取总蛋白,Western blot实验结果显示,C.pn感染VSMC30min后p-Akt表达水平开始升高：随着感染时间延长,p-Akt表达水平逐渐升高,1h达到高峰,6h开始下降,并持续至24h;各组VSMC中总Akt表达水平无显著差异;5. Western blot实验结果显示,用LY294002预处理的C.pn感染组VSMC p-Akt的条带灰度较单纯C.pn感染组明显减弱(P<0.05),差异有统计学意义,各组VSMC中总Akt条带灰度无显著差异：6. Wound-healing实验结果显示,LY294002预处理的C.pn感染组VSMC向划痕中央迁移的面积明显小于单纯C.pn感染组(P<0.05)。Transwell实验结果显示,LY294002预处理的C.pn感染组VSMC穿膜细胞数明显低于单纯C.pn感染组(P<0.05),差异有统计学意义；7.使用TLR2中和抗体预处理VSMC, Western blot实验结果显示,C.pn感染VSMC后,用TLR2中和抗体预处理的C.pn感染组VSMC的p-Akt的条带灰度较单纯C.pn感染组减弱(P<0.05),差异有统计学意义,各组VSMC中总Akt的条带灰度无显著差异。结论C.pn感染经由TLR2通过PI3K/Akt信号通路促进VSMC迁移。