龙眼(Dimocarpus Longan Lour.)成花逆转cDNA-AFLP分析

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:gaolch004
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龙眼成花逆转(floral reversion)被认为是造成龙眼大小年结果的主要原因之一,而小年产量往往不及大年的一半,成为龙眼生产上的老大难问题。因此,进一步明确龙眼成花逆转的分子机理,阐明龙眼成花逆转过程中从基因到性状表达的规律,对于龙眼成花逆转的调控及良种培育,减少经济损失具有重要的理论和实践意义。本研究运用cDNA-AFLP技术,通过比较龙眼正常成花和成花逆转花芽的RNA水平上的表达差异,寻找与龙眼成花逆转紧密相关的cDNA差异片段,以期为今后克隆龙眼成花逆转相关基因奠定基础。本研究以龙眼正常成花花芽和成花逆转花芽为研究对象,分别提取总RNA并进行逆转录,合成双链cDNA后进行AFLP(Amplified fragment lengthpolymorphism)分析。cDNA-AFLP操作中选择识别6个识别位点的EcoR I和4个识别位点的Mse I对双链cDNA进行限制性酶切,得到两种粘末端分别连接上两种人工接头,预扩增一次后将扩增后的模板稀释90倍,再用64对2+2选择性引物扩增并在6%聚丙烯酰胺凝胶电泳后用银染方法染色进行指纹图谱分析。经分析共获得差异条带25条,二次扩增后送生物公司测序,获得差异片段序列14条。数据库同源性分析,较强同源性的序列有7条,较弱同源性的有6条,有一条没有匹配结果。同源性较强的序列中有3条推测与龙眼成花逆转相关,分别为TDF331,为龙眼EGases基因;TDF112,NIMA related protein kinases基因;TDF313 chitinase CHI1基因。其中TDF331和TDF313在龙眼成花逆转时期上调表达,TDF112在龙眼成花逆转时期下调表达。
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