黄曲霉毒素B1（AflatxoniB1,AFB1）是毒性最强的真菌毒素之一,它具有致畸致癌致突变的三致作用,由于它在花生、玉米等食品中广泛存在,因此严重危害了人们的健康。AFB1是一种半抗原,酶联免疫分析法（ELISA）是检验半抗原的一种快速、简便的分析方法,而该检测方法很大程度上依赖于高质量的抗体。与传统免疫动物法获得的抗体相比,重组抗体技术由于采用微生物表达的方法,获得抗体的周期短,成本低,逐渐成为人们研究的热点。本实验在已经从Tomlinson I+J单链抗体文库中筛选出抗AFB1单链抗体基因H4的基础上对其进行表达,以期获得大量与AFB1结合的单链抗体。通过测序发现H4的前1/5处有一琥珀抑制子TAG,说明即TAG没有起到终止作用而是由于密码子的零星改变而被翻译为谷氨酸。为了保证基因不被提前终止,实验中将TAG突变为编码谷氨酸的GAA,之后通过克隆载体、表达载体的构建,再将表达载体转化表达宿主大肠杆菌BL21 （DE3）和乳酸克鲁维酵母GG799,进行诱导表达和生物活性的鉴定实验。结果表明,突变后的H4即H4-Glu能在大肠杆菌BL21 （DE3）中成功表达,表达量为25.5 mg/L,其与AFB1的结合活性明显;H4-Glu在乳酸克鲁维酵母中实现了分泌表达,与AFB1有一定的结合活性,但由于获得的是单拷贝整合转化子,表达量不高。对于获得的抗体,测定了游离AFB1对其的半数抑制率IC50及抗体与AFB2,AFG1,AFG2的交叉反应性。AFB1对抗体的IC₅₀为3.77 ng/mL,抗体与AFB2、AFG1、AFG2均有交叉反应,从强到弱依次为AFG1、AFB2、AFG2。实验发现纯化的抗体在4℃可至少存放3个月;冷冻干燥对抗体的活性有影响,可使其活性损失约50%;抗体可以耐受40℃高温,保温4 h后活性仍可残留40%,但不能耐受50℃高温;中偏碱性条件下有利于抗体的活性保存。本实验成功将抗AFB1单链抗体基因H4中的TAG突变为GAA;分别将其在原核表达系统中的大肠杆菌BL21 （DE3）和真核表达系统中的乳酸克鲁维酵母GG799中获得了成功表达,比较而言,大肠杆菌表达系统更适合于表达抗AFB1单链抗体基因,为AFB1的检测奠定了基础。