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研究背景和目的:神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)是能分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞,能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。因此,神经干细胞有可能成为脑组织移植的新型供体源,能较好地解决神经移植治疗的伦理道德及供体不足等问题,可望成为解决中枢神经系统功能重建和神经再生的一条新途径。此外,也为了解和阐明神经发育机制提供了有力的证据。位于侧脑室附近的室管膜前下区(Anterior subventricular zone, SVZa)是神经干细胞较为集中的地方之一。从胚胎期至成年阶段,此区神经干细胞在体内背-腹信号控制下,不断沿着嘴侧迁移流(Rostral migratory stream,RMS)向嗅球(Olfactory bulb, OB)迁移,最后在OB分化为中间神经元,并成为其终身更新的来源。此区神经干细胞具有以下特点:(1)能长距离定向迁移;(2)自产生起即具备发育为神经元的潜能;(3)在迁移过程中始终维持增殖状态和神经元分化潜能而不进一步分化。因此,SVZa神经干细胞成为研究神经干细胞增殖、迁移和分化调控机制研究的较佳模型,并成为神经干细胞研究的重点。在SVZa神经干细胞向OB迁移、分化的过程中,需要很多内在和外在的因素来共同控制。研究表明,Dlx(distall-less homeobox)基因家族中的Dx5基因与OB中间神经元的发育密切相关。因为基因敲除鼠的实验表明:Dlx5基因在OB中间神经元分化和OB受体神经元轴突连接中起着主要作用;是OBSVZ祖细胞成熟为分离后的局部环路(中间)神经元所必须的;而且只对嗅系统发育有关的神经干细胞的分化进行调节,是出生后神经发生必须的基因。因此推测,Dlx5基因在SVZa神经干细胞向OB定向迁移及分化的过程中起着重要的作用,但上述研究对Dlx5基因的作用及其机制还远未阐明。本研究以SVZa神经干细胞的迁移、分化模型为基础,以体外培养的新生大鼠SVZa神经干细胞为研究对象,通过基因转染等方法研究Dlx5基因在SVZa神经干细胞中的表达规律及其对神经元分化的影响,这方面的研究鲜见报道。方法:1.运用DNA重组技术,将小鼠Dx5基因(m Dx5)从原核表达质粒上用内切酶消