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第一部分虎纹捕鸟蛛毒素组学研究
虎纹捕鸟蛛(Ornithoctonus huwena Wang)分布在中国南方的云南和广西一带,是中国毒性最强的蜘蛛之一,其毒液中富含各种蛋白质与多肽成份。从虎纹捕鸟蛛毒液中已经鉴定到包括虎纹毒素-1、虎纹凝集素-1等多种多肽毒素,为进一步了解虎纹捕鸟蛛毒素的组成以及其致毒机理并为将来从中筛选有开发潜力且具有药理学意义的分子,我们采取蛋白质组学的方法对其粗毒进行了全面的分析。
为便于分析,我们采取分子筛层析首先将粗毒分为分子量>10kDa的蛋白质组分和分子量<10 kDa的多肽类组分。对于蛋白质组分,我们采用一维电泳(SDS-PAGE)和二维双向凝胶电泳(2DE)进行分离,经基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)以及液相电喷雾四级杆时间飞行质谱(LC-ESI-Q-TOF)鉴定,总共鉴定了90个蛋白质点,其中包括:有重要意义的酶、结合蛋白以及具有重要生物学功能的蛋白质。对于虎纹捕鸟蛛毒素中的多肽类组分,采用阳离子交换色谱及反相高效液相色谱进行分离,通过质谱MALDI-TOF-TOF进行检测,总计发现有超过130种不同分子量的成分存在,其中47条多肽采用Edman降解测序方法进行了测序。
本研究首次全面分析了虎纹捕鸟蛛毒素的组成,揭示了蜘蛛毒素种类及功能的复杂性和多样性,为深入研究虎纹捕鸟蛛毒素的组成,进化,以及毒素分子结构与功能的关系奠定了基础。
第二部分大鼠海马突触质膜蛋白质组学研究
神经系统是生命活动中起着整合和调节作用的信息系统,海马是神经系统中与生物的各项感觉、运动、学习、记忆等功能有着密切关联的组织。神经元是神经系统的结构和功能单位,具有接受、整合和传递信息的功能。神经元发出和接受神经冲动的基本结构是突触,它是神经元与神经元之间相互接触的部位。当受到外界刺激后,神经递质从突触前的神经元轴突末端被释放并与突触后目标神经元上的受体相结合。突触的质膜上分布有许多与信号传导等功能相关的蛋白质。本文为鉴定大鼠海马突触质膜蛋白质,利用不连续蔗糖密度梯度分离纯化得到样品,采用两向 Blue Native-PAGE/SDS-PAGE电泳分离突触质膜蛋白质,结合HCT质谱对其进行鉴定分析。我们一共鉴定到281个非冗余蛋白质,具有1个或多个跨膜区的蛋白质约占36%,与信号转导功能相关的蛋白质占13.3%。
本研究是第一次运用蛋白质组学技术对大鼠海马突触质膜蛋白质进行分析,其结果表明Blue Native-PAGE/SDS-PAGE是一种有效地分离膜蛋白质的手段,并且为进一步深入研究神经突触以及相关方面的疾病提供了数据参考。