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目的:本研究以葡聚糖硫酸钠(DSS)复制溃疡性结肠炎(UC)病理模型。通过形态学、血清酶学和分子生物学等方法研究辛开苦降法治疗溃疡性结肠炎,探讨辛开苦降法治疗溃疡性结肠炎机制。 方法:实验以60只C57小鼠作为研究对象,采用葡聚糖硫酸钠法(简称DSS)复制溃疡性结肠炎模型。将小鼠分为:正常组、模型组、对照组(即柳氮磺吡啶组)、乌梅丸组、半夏泻心汤组、甘草泻心汤组。正常组正常饮水、进食,不给予任何药物和灌胃动作刺激。其余组给予3%DSS溶液自由饮用7天,造模前3天开始分别给予治疗药物(10%生理盐水、柳氮磺吡啶片、乌梅丸、半夏泻心汤、甘草泻心汤)连续给药10天。最后禁食禁水,样本采集。①测量小鼠结肠长度:②检测小鼠血清的SOD、IL-6、MPO含量;③用Western blot法检测结肠组织中iNOS、COX2、NF-kB蛋白含量;④用HE染色法检查小鼠结肠病理变化情况。所有数据使用SPSS20.0软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差((x)±s)表示,数据进行正态性检验,两组间采用t检验比较,多组间采用单因素方差分析比较组间数据,以p<0.05认为具有统计学差异。 结果:①小鼠体重:与正常组比较,模型组小鼠体重明显降低,差异有统计学意义(p<0.05);与模型组比较,对照组、各中药治疗组小鼠体重变化差异有统计学意义(p<0.05);与对照组相比,各中药治疗组体重变化无统计学意义(p>0.05)。②DAI评分:与正常组对比,其余各组小鼠DAI评分明显升高;与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠DAI评分低于模型组;与对照组相比,乌梅丸组、半夏泻心汤组、甘草泻心汤组小鼠DAI评分低于对照组。③MPO:与正常组对比,模型组小鼠血清MPO的含量明显增加,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠血清MPO的含量显降低,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,各中药治疗组小鼠血清MPO的含量明显降低,差异有统计学意义(*p<0.05)。④IL-6:与正常组对比,模型组小鼠血清IL-6的含量明显增加,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠血清IL-6的含量明显降低,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,半夏泻心汤组、甘草泻心汤组小鼠血清IL-6的含量增加,差异具有统计学意义(*p<0.05),乌梅丸组小鼠血清IL-6的含量降低,差异不具有统计学意义(p>0.05)。⑤SOD:与正常组对比,模型组小鼠血清SOD的含量明显降低,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠血清SOD的含量明显增加,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,各中药治疗组小鼠血清SOD的含量增加幅度大,差异有统计学意义(*p<0.05)。⑥iNOS:与正常组对比,模型组小鼠结肠组织中iNOS蛋白含量明显增高,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠结肠组织iNOS蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,乌梅丸组、半夏泻心汤组小鼠结肠组织iNOS蛋白含量降低幅度大,差异有统计学意义(*p<0.05),甘草泻心汤组小鼠结肠组织iNOS蛋白含量增加,差异不具有统计学意义(p>0.05)。⑦COX2:与正常组对比,模型组小鼠结肠组织中COX2蛋白含量明显增高,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠结肠组织COX2蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,半夏泻心汤组、甘草泻心汤组小鼠结肠组织COX2蛋白含量降低,差异有统计学意义(女p<0.05),乌梅丸组小鼠结肠组织COX2蛋白含量增加,差异有统计学意义(*p<0.05)。⑧NF-kB:与正常组对比,模型组小鼠结肠组织中NF-kB蛋白含量明显增高,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠结肠组织NF-kB蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,甘草泻心汤组含量降低,差异有统计学意义(*p<0.05),乌梅丸组、半夏泻心汤组含量降低,差异没有统计学意义(p>0.05)。⑨小鼠结肠长度:与正常组对比,模型组小鼠结肠长度明显缩短,差异有统计学意义(#p<0.05);与模型组对比,对照组、各中药治疗组小鼠结肠长度明显比模型组长,差异有统计学意义(*p<0.05);与对照组相比,各中药治疗组差异不具有统计学意义(p>0.05)。⑩病理学检测:肉眼观察小鼠结肠组织:正常组小鼠结肠外观正常,未见充血,颜色正常,浆膜面、黏膜面和肌层未见有明显病变。模型组小鼠部分结肠内出现粪便有节段性充满肠道,明显充血、瘀血,肠黏膜及肌层明盈变薄、变短。对照组与各中药治疗组病变较模型组明显减轻。与对照组相比,各中药治疗组病变以及结肠形态都有所减轻。光学显微镜下观察小鼠结肠组织:正常组小鼠结肠黏膜完整,黏膜下未见炎症,肌层结构完整。模型组小鼠结肠失去正常结构,结肠黏膜下游炎症,细胞浸润,结肠腺体消失,被浸润的炎症细胞替代。对照组与各中药治疗组小鼠结肠结构和黏膜炎症,炎细胞浸润与模型组比较明星减轻。与对照组相比,各中药治疗组小鼠结肠结构,炎细胞浸润都有所减轻。 结论:辛开苦降法能通过抗氧化应激作用,以及改善肠道上皮黏膜屏障功能,达到治疗UC目的。经实验结果验证,辛开苦降法类方在抗氧化应激、保护黏膜屏障方面优于柳氮磺吡啶。并且在以泻心汤、乌梅丸为代表方剂中,半夏泻心汤和甘草泻心汤侧重于修复黏膜损伤,缩小溃疡面积,起到改善肠道上皮黏膜屏障功能,保护黏膜完整性。其中半夏泻心汤适用急性发作期,而甘草泻心汤更适用于慢性恢复期;乌梅丸更侧重于抗氧化应激作用,通过抑制iNOS-COX2/NF-kB信号转导通路,抑制IL-6炎症因子,增加SOD抗氧化能力,起到抗炎作用,达到治疗UC的目的。