【摘 要】
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本文研究了油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria nuclear polyhedrosis virus,简称BsNPV)p35基因的抗凋亡功能。采用PCR的方法从BsNPV基因组中扩增出p35基因,并对它
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本文研究了油桐尺蠖核型多角体病毒(Buzura suppressaria nuclear polyhedrosis virus,简称BsNPV)p35基因的抗凋亡功能。采用PCR的方法从BsNPV基因组中扩增出p35基因,并对它进行了序列测定,与其他病毒的p35基因相比,它的保守性非常强。把BsNPVp35基因克隆到原核表达载体pGEX-KG上,最终得到含有重组表达载体pGBp35的BL21重组菌。用IPTG对重组菌进行诱导,并对它进行时相分析。采用不连续系统垂直板SDS-PAGE对诱导后的蛋白进行分析。结果表明:表达蛋白的分子量约为62kD,大于35kD,这是由于pGEX-KG表达载体表达的是一融合蛋白,在P35蛋白之前还带有27kD的GST蛋白,两者融合而成。 我们还把BsNPVp35基因克隆到真核表达载体pIZ/V5-His上,并且突变了p35基因的终止密码子,在其后连接报道基因egfp,并使它们的读码框一致,重组载体命名为pIZ/V5-p35-egfp。用pIZ/V5-p35-egfp转染棉铃虫细胞,加入凋亡因子,观察BsNPV P35蛋白能否延缓棉铃虫细胞的凋亡。由于某些杆状病毒的p35基因不具有抗凋亡的能力,还由于杆状病毒的p35基因抗凋亡功能的发挥具有宿主特异性,所以这个结果有待分析。
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