论文部分内容阅读
目的：通过观察ECV304细胞和转hVEGF165基因L929细胞在再生丝素膜上的生物学行为，研究再生丝素膜对VEGF基因转录表达的影响。方法：首先对物理交联再生丝素膜进行了毒性试验和粘附试验，并研究了其对附着L929细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。通过ECV304细胞在再生丝素膜表面的培养，观察了细胞的生长形态，测绘了生长繁殖曲线，并通过ELISA方法测定了其VEGF的分泌水平。接下来用RT-PCR技术从ECV304细胞中克隆出hVEGF165基因，构建重组真核表达质粒pcDNA3.0-VEGF，鉴定正确后用脂质体转染法导入L929细胞，G418筛选获得能稳定表达VEGF的L929转基因细胞。然后将转基因细胞在再生丝素膜表面培养，观察细胞的生长形态，用实时定量RT-PCR方法测定转基因细胞VEGF的转录水平，ELISA方法测定转基因细胞VEGF的表达水平。结果：再生丝素膜无细胞毒性，成纤维细胞在其表面粘附性能正常，对细胞周期和细胞凋亡未产生不良影响，也不影响血管内皮细胞的正常生长和其VEGF的分泌。成功克隆了hVEGF165基因，构建了重组真核表达质粒pcDNA3.0-VEGF，获得了稳定表达VEGF的L929转基因细胞。转基因细胞在再生丝素膜上的生长也不受影响，实时定量RT-PCR和ELISA检测显示再生丝素膜不影响该转基因细胞VEGF基因的转录与表达。结论：再生丝素膜不影响ECV304细胞和L929细胞的正常生长，再生丝素膜也不影响转hVEGF165基因L929细胞VEGF基因的转录与表达。再生丝素膜具有优秀的生物相容性。